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3-甲基胆蒽对大鼠肝细胞细胞色素P450 1A的诱导作用
目的研究3-甲基胆蒽(3-methylcholanthrene,3-MC)对原代培养大鼠肝细胞细胞色素P450 1A(CYP 1A)酶活力的诱导作用,并探讨其时间-效应和剂量-效应关系.方法原位2步胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞,无血清条件下培养细胞,并用不同剂量的3-MC诱导肝细胞24 h或48 h.乙氧基试卤灵(ethoxyresorufin,EOR)为CYP 1A酶活力探针药,高效液相色谱法(HPLC)测定试卤灵(resorufin,RSF)浓度.结果实验条件下对照组和3-MC诱导组的RSF均可被检测,与对照细胞相比,除0.005 μmol/L的3-MC对原代培养大鼠肝细胞EROD无显著诱导作用外,其余剂量(0.05,0.5,5 μmol/L)的3-MC均明显诱导酶活力,酶活力分别被上调至对照组的5.08,23.3,33.6倍(P＜0.01),3-MC的诱导作用在24 h达强,而其在48 h的诱导作用与24 h相似.3-MC对原代培养大鼠肝细胞CYP 1A酶活力的诱导作用呈明显的剂量依赖性.结论 3-MC对大鼠原代培养肝细胞CYP 1A酶活力有明显的诱导作用.
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稳定表达细胞色素P4501A1人肝癌细胞系的建立
目的:建立稳定表达人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌细胞系(Bel-7402).方法:通过将人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的表达质粒转染到人肝癌细胞系(Bel-7402),经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成系,Western Blotting检测蛋白的表达.细胞增殖试验鉴定CYP1A1的多环芳烃类底物二甲基苯并蒽(DMBA)对Bel-7402/1A1细胞的增殖抑制作用.双核微核实验对Bel-7402/1A1细胞进行了遗传毒理的短期实验.结果:转染后筛选得到的Bel-7402抗性克隆,Western Blotting检测表明有较高的CYP1A1蛋白表达.细胞暴露于DMBA时,Bel-7402/1A1与Bel-7402细胞相比,细胞增殖明显抑制.双核微核试验表明Bel-7402/1A1细胞的微核率随DMBA浓度增高而显著增加,Bel-7402无明显变化.连续传代后仍有CYP1A1标志酶EROD的较高表达,该酶活性能被CYP1A1抑制剂α-萘黄酮抑制.结论:建立了一个新的稳定表达CYP1A1的1个肝癌细胞系(Bel-7402/CYP1A1),可代谢多环芳烃化合物产生更大的毒性.该细胞系可用来筛选能被CYP1A1代谢的化合物,或能抑制CYP1A1活性的化合物,并可用来研究CYP1A1的催化性质及被CYP1A1代谢的化合物的毒性机理.
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山葵对肺癌组织hnRNP A2/B1表达的影响
目的 通过建立大鼠肺癌模型,研究山葵提取液对肺癌早期分子标志物hnRNPA2/B1的调节作用,进一步阐明山葵抗肺癌作用的分子机制.方法 将36只Wistar大鼠随机分为肺癌模型组(对照组)和山葵治疗组(实验组).按1 mL碘油内含3-甲基胆蒽(MCA)50 mg配制致癌质碘油.每只大鼠均用MCA碘油溶液0.1 mL在左肺叶支气管内灌注诱癌.实验组于诱癌前1周开始胃饲山葵提取液至动物被处死,对照组于同一时间胃饲等量生理盐水.造模后第30、60及90 d分批处死大鼠,每次6只.免疫组织化学法和RT-PCR法检测肺癌组织hnRNP A2/B1的蛋白和基因表达.结果 山葵提取液能降低肺癌组织hnRNP A3/B1的蛋白表达,在第30、60及90 d的抑制率分别为51.O%、51.O%和45.1%.山葵提取液同时降低了hnRNP A2/B1 mRNA的表达,在第60和90 d的抑制率分别为79.5%和58.O%.结论 山葵提取液能降低肺癌早期分子标志物hnRNP A2/B1的表达,可能是其抗肺癌的分子机制之一.
关键词： 山葵 大鼠 3-甲基胆蒽 肺癌 hnRNP A2/B1 -
3-甲基胆蒽诱发大鼠颌下腺肿瘤的实验研究
目的:研究涎腺肿瘤的发生和发展规律,建立涎腺肿瘤动物模型.方法:采用化学致癌物3-甲基胆蒽对40只SD大鼠颌下腺腺体内进行直接注射的方法,观察诱发产生颌下腺肿瘤情况.结果:共诱发肿瘤32例,其中鳞癌4例,平滑肌肉瘤28例.并对所诱发的两种肿瘤的组织学、免疫组织化学和超微结构进行了观察,探讨了3-甲基胆蒽对大鼠颌下腺的致癌作用及所诱发肿瘤的组织起源.结论:3-甲基胆蒽诱发大鼠颌下腺肿瘤能成功地建立颌下腺肿瘤的动物模型,并以平滑肌肉瘤多见.
