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益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响
目的 研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4 ) 及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、 Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7 d.末次灌胃给药2 h后,心脏采血,离心后分离血清.体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24 h,收集细胞,用Real time PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达.结果 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4 、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4 、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显.结论 益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用.
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TRAF-6在人肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖能力的影响
目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号转导通路中关键节点蛋白在人肝癌细胞株QGY中的表达及其对QGY细胞增殖能力的影响.方法 通过RT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞株LO2和QGY细胞株中TLR信号转导通路关键节点mRNA和蛋白的表达水平；采用TRAF-6-siRNA沉默关键节点蛋白TRAF-6的表达,Western blot检测沉默效果,MTT法检测TRAF-6基因沉默后QGY细胞的增殖情况.结果 QGY细胞与LO2细胞相比,MAL和TRAF-6基因表达水平明显升高(P＜0.05),TRAM和TRIF基因表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)；转染siRNA后QGY细胞TRAF-6蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05),细胞存活率明显下降(P＜0.05).结论 TLR信号转导通路中关键节点蛋白MAL和TRAF-6在肝癌细胞中的表达水平高于在正常肝细胞中的表达水平；TRAF-6对肝癌细胞的增殖具有一定的促进作用,有望成为分子靶向治疗原发性肝癌新的作用靶点.
关键词： TOLL样受体信号转导通路 肝肿瘤 TRAF-6 RNA干扰 细胞增殖 -
原发性干燥综合征腮腺超声表现及对病情严重程度的判断价值
目的:研究原发性干燥综合征(pSS)腮腺超声表现及其对病情严重程度的判断价值.方法:选择40例原发性干燥综合征患者和40例女性健康志愿者作为研究对象,分别纳入pSS组和对照组.进行腮腺超声检查并测定腮腺应变率比值(strain ratio,SR)、阻力指数(RI)以及血流速度(PSV)增加率;采集外周血单个核细胞并测定肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、TCL-1的表达量;采集血清并测定IL-1p、IL-17、IL-18、IL-27含量.结果:pSS组患者腮腺SR值显著高于对照组,腮腺实质内动脉RI值、PSV增加率显著低于对照组;pSS组患者外周血中CD4+ TRAF-6+T细胞、CD4+ TCL-1+T细胞、CD19+ TRAF-6+B细胞、CD19+ TCL-1+B细胞比例以及血清IL-1β、IL-17、IL-18、IL-27含量显著高于对照组,CD14+ TRAF-6+淋巴细胞、CD14+ TCL-1+淋巴细胞含量与对照组无差异;外周血中CD4+TRAF-6+T细胞、CD4+ TCL-1+T细胞、CD19+ TRAF-6+B细胞、CD19+ TCL-1+B细胞的比例以及血清中IL-1β、IL-17、IL-18、IL-27含量与腮腺SR值呈正相关,与腮腺RI值以及PSV增加率呈负相关.结论:pSS患者的腮腺超声特征为SR值升高、实质内小动脉RI值降低以及酸刺激后PSV增加率降低,且上述超声特征与外周血单个核细胞指标、血清指标具有相关性,是判断原发性干燥综合征病情的理想指标.
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TRAF-6真核表达载体的构建和转染牙龈上皮细胞
目的:构建TRAF-6与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,为研究其在口腔疾病发病中的作用奠定基础.方法:应用基因重组技术,将反转录PCR得到的TRAF-6基因,克隆入荧光真核表达载体pEGFP-N3中,用含卡那霉素LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子经HindⅢ和KpnⅠ双酶切分析、PCR鉴定.重组质粒酶切鉴定正确后,以脂质体转染牙龈上皮细胞.分别由间接免疫荧光和免疫组织化学检测目的蛋白的表达.结果:获得的TRAF-6基因重组真核表达质粒,经间接免疫荧光和免疫组化检测,TRAF-6成功转染上皮细胞.结论:成功克隆TRAF-6基因,构建了融合有TRAF-6基因的真核表达质粒,对其在体外进行了表达,并转染牙龈上皮细胞,为进一步的研究奠定了基础.
