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益气复脉方对慢性心衰大鼠基质金属蛋白酶活性调节作用的实验研究
目的：观察注射用益气复脉方(冻干)(YQFM)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMPs)蛋白表达的影响,探讨益气复脉方对基质金属蛋白酶系统的调节作用与心肌细胞外基质(EMC)重构的相关性。方法100只雄性 wistar大鼠中随机选取90只通过腹主动脉缩窄法制作大鼠慢性心力衰竭模型,10只作为假手术组常规饲养。术后8 w,以多普勒超声心动图检测左室射血分数(LVEF)≤60%为成模标志。成模大鼠随机分为6组：空白模型组、卡托普利组(卡托普利片4.88 mg/kg)、生脉组(生脉注射液4 mL/kg)及益气复脉中、低、高(520 mg/kg,260 mg/kg,1040 mg/kg)剂量组。连续给药14 d后,以 HE染色法观察大鼠心肌组织病理变化以蛋白质印记法检测大鼠心肌组织中 MMP 2,MMP 3,MMP 9以及TIMP 1,TIMP 2的含量。结果与假手术组比较,空白模型组心肌间质胶原纤维大量增生,EMC结构显著改变,可见局灶性纤维瘢痕；MMP 2、MMP 3、MMP 9含量显著升高(P<0.01),TIMP 1/2含量显著降低(P<0.01),MMP 2/TIMP 2比值升高为假手术组的4倍~6倍。与空白模型组比较,各治疗组心肌肌束间及血管周围胶原纤维出现轻、中度增生,MMP 2、MMP 3、MMP 9降低,TIMP 1/2升高,MMP 2/TIMP 2比值降低为假手术组的1~3倍。其中,YQFM各剂量组 MMP 2、MMP 3、MMP 9含量显著低于生脉组(P<0.05),除YQFM低剂量组MMP 2显著高于卡托普利组(P<0.05)外,其余各YQFM组MMP 2、MMP 3、MMP 9含量与卡托普利组比较差异无统计学意义(P>0.05)。YQFM各剂量组 TIMP 2含量显著高于生脉组(P<0.05),与卡托普利组比较差异无统计学意义(P>0.05)；YQFM各剂量组 TIMP 1含量与 MMP 2/TIMP 2比值显著低于卡托普利组(P<0.05),与生脉组比较差异无统计学意义(P>0.05)；结论慢性心衰大鼠心肌间质胶原纤维增生、胶原网络结构改变导致 EMC重构,与基质金属蛋白酶系统活性增强有关。益气复脉方通过降低 MMP 2,MMP 3,MMP 9的含量,升高 TIMP 1,TIMP 2的含量,维持 MMP 2/TIMP 2动态平衡,抑制 MMPs活性,改善慢性心衰大鼠心肌细胞外基质重构的程度,缓解大鼠慢性心衰症状。
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益气复脉方对慢性心衰大鼠心功能及心衰标志物的影响
目的:研究注射用益气复脉(冻干)(YQFM)对慢性心衰大鼠心功能及心力衰竭标志物的影响.方法:90只雄性Wistar大鼠随机选取80只,采用腹主动脉缩窄法制作大鼠慢性心力衰竭模型,其余10只为假手术组;术后8周以LVEF％≤60％确定成模,模型组大鼠随机分为5组:空白模型组、卡托普利组(卡托普利片4.88 mg· kg-1)、益气复脉中/低/高(520,260,1040 mg·kg-1)剂量组.连续给药14 d,经多普勒超声心动图,测量左室舒张末期内径(LVIDd),左室收缩末期内径(LVIDs),舒张及收缩期末后壁厚度(LVPWd,LVPWs),舒张及收缩期末室间隔厚度(IVSd,IVSs),左室射血分数(LVEF％),左室短轴缩短率(LVFS％),评价各组心功能变化.以酶联免疫分析法(ELISA)检测大鼠血清中脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP),和肽素(copeptin,CPP)的浓度.结果:①心功能检测结果:术后8周与假手术组比较,模型组LVIDs显著增加(P＜0.05),LVPWs,LVEF％,LVFS％显著降低(P＜0.05).给药14d后,模型组LVIDs下降,LVPWs,LVFS％升高,与假手术组比较已无明显差异(P＞0.05).空白模型组LVEF％与假手术组比较仍显著较低(P＜0.05),药物干预各组LVEF％均回升至60％以上,与假手术组已无明显差异(P＞0.05),其中YQFM高剂量组较空白模型组LVEF％值显著升高(P＜0.05).②心衰标志物检测结果:空白模型组BNP,CCP浓度明显高于假手术组(P ＜0.05或P＜0.01).给药各组BNP,CCP浓度明显低于空白模型组(P＜0.05或P＜0.01);其中YQFM高剂量组BNP浓度低,与假手术组比较差异无显著性(P＞0.05);卡托普利组CCP浓度低,明显低于YQFM各浓度组(P＜0.01),yQFM各组间无明显差异(P＞0.05).结论:益气复脉方能降低心衰大鼠LVIDs,增加LVPWs进而改善心室重塑;提高LVEF％,LVFS％改善大鼠心功能;降低心衰大鼠血清BNP,CCP浓度,缓解心力衰竭程度.在心功能指标差异不显著时,通过对心衰标志物BNP和CCP的检测,能更好的评价益气复脉方对心力衰竭程度及其预后的影响.
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HPLC法同时测定益气复脉方中3种活性成分的含量
目的 建立同时测定益气复脉方中芍药苷、甘草苷和甘草酸含量的方法.方法 采用HPLC法测定芍药苷、甘草苷和甘草酸的含量,Purospher RP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);乙腈-1 mL·L-1磷酸进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长为230和237 nm;柱温为30 ℃;进样量为10 μL.结果 芍药苷、甘草苷和甘草酸的质量浓度分别在0.02~0.31,0.02~0.32和0.02~0.30 mg·mL-1范围内线性关系良好,r值均为0.999 9,3种成分的平均回收率分别为97.98%,98.23%和97.49%,RSD值均小于3.00%.结论 该方法简便、准确、重复性好,可用于益气复脉方的内在质量控制.
