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补骨脂酚经蛋白激酶Cε拮抗内皮细胞缺血再灌注损伤
目的 研究补骨脂酚(BAK)对血管内皮细胞模拟缺血再灌注损伤(SIR)的保护作用及其分子机制. 方法 用不同浓度BAK(2,5,10 μmol/L)预处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h,接受模拟缺血再灌注(SIR)损伤(缺血45min,再灌注4 h),用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力和凋亡率,酶活性测定法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,DHE荧光探针检测细胞中活性氧(ROS)的含量,Western blot法检测细胞膜PKCε、细胞质PKCε、Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3和gp91 phox蛋白的表达水平.使用PKCε特异性阻断剂εV1-2阻断该信号通路,进一步探究PKCε信号通路在其中的作用. 结果 BAK预处理呈剂量依赖性地改善内皮细胞SIR损伤,且10 μmol/L剂量效果佳.BAK预处理可明显提高缺血再灌注损伤后内皮细胞活力,减少LDH释放,增强细胞中SOD活性,降低MDA含量及gp91 phox蛋白表达量,减少ROS的产生;促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制凋亡蛋白cleaved caspase 3,Bax的表达,降低再灌注损伤后细胞凋亡率;并且显著促进PKCε膜转位,而特异性阻断PKCε信号通路可逆转BAK的上述保护作用(均P＜0.05). 结论 BAK通过激活PKCε信号通路,进而增强细胞抗氧化应激和抗凋亡能力,终缓解内皮细胞缺血再灌注损伤.
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PKC-ε、hi calponin在不同孕期小鼠子宫平滑肌中的表达及意义
目的 探讨蛋白激酶C epsilon( protein kinaseC epsilon,PKC-ε)及碱性调宁蛋白(h1 calponin,h1 CaP)在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中总蛋白和磷酸化蛋白的时空表达变化及与足月临产、早产的关系和机制.方法 建立小鼠酒精灌胃早产模型.按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组(孕7 d)、中孕组(孕12 d)、晚孕组(孕18 d)、足月产组和早产组,每组各10例.应用Western blot检测子宫平滑肌中PKC-ε、磷酸化PKC-ε (pPKC-e)、h1 CaP、磷酸化h1 CaP( ph1 CaP)的蛋白表达.结果 足月产组和早产组PKC-ε蛋白表达均显著高于未孕、早孕、中孕组(P＜0.01),晚孕组、足月产组、早产组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；足月产组和早产组h1 CaP蛋白表达均显著高于未孕、早孕、中孕组(P＜0.01),晚孕组、足月产组、早产组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；足月产组和早产组pPKC-ε/PKC-ε值均显著高于未孕、早孕、中孕组及晚孕组(P＜0.01),足月产组与早产组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；足月产组和早产组ph1CaP/h1 CaP值均显著高于未孕、早孕、中孕组及晚孕组(P＜0.01),足月产组与早产组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；pPKC-e/PKC-ε的变化与ph1 CaP/h1 CaP的变化呈正相关(r=0.73,P＜0.05).结论 PKC-ε及h1 CaP蛋白表达在临产前即达到高峰,pPKC-ε及ph1 caP水平在临产时达高峰.PKC-ε可通过激活h1 CaP参与足月产及早产的分娩发动.
关键词： 蛋白激酶C epsilon 碱性调宁蛋白 分娩启动 早产 子宫平滑肌
