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聚乙烯亚胺介导BmkCT基因抑制C6胶质瘤细胞C-Myc、VEGF表达
目的：应用阳离子聚合物聚乙烯亚胺（polyethyleneimine，PEI）介导东亚钳蝎氯离子通道毒素（ Buthus martensii Karsch Chlorotoxin-like Toxin，Bmk CT）基因转染 C6胶质瘤细胞，观察其对 C6细胞内 C-Myc、VEGF 表达的影响。方法：将 PEI 分别和 pEGFP-N1-Bmk CT、pEGFP-N1质粒混合，获得 PEI ／ pEGFP-N1-Bmk CT 和 PEI ／ pEG-FP-N1两种复合物，将其转染 C6细胞，MTS 法观察细胞增殖和存活活力，48 h后通过 Western-blot 方法检测 C-Myc、VEGF 蛋白表达水平。结果：PEI ／ pEGFP-N1-Bmk CT 转染 C6细胞48 h后较 PEI ／ pEGFP-N1能够显著抑制C6细胞增殖和存活活力，同时抑制 C-Myc、VEGF 蛋白表达。结论：PEI ／ pEGFP-N1-Bmk CT 转染 C6细胞可能通过抑制 C-Myc、VEGF 表达进而抑制 C6细胞增殖和血管生成。
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东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa在大肠杆菌中的异源表达及其对宿主菌增殖的影响
目的 在大肠杆菌中异源表达东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK Cta,并观察其对宿主菌增殖的影响.方法 构建BmK CT基因原核表达质粒pExSecI-rBmK Cta,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定.光密度法检测含不同质粒的大肠杆菌BL21(DE3)及空菌在37℃,LB液体培养基中的生长速率.结果 重组原核表达质粒pExSecI-rBmK Cta经PCR、双酶切和测序证明构建正确.目的蛋白的表达量占全菌总蛋白的19.94%,为可溶性表达,且具有良好的反应原性.rBmK Cta的异源表达显著抑制了大肠杆菌在对数生长期的增殖.结论 rBmK Cta在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,且对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用.提示BmK CT可能特异性地作用于宿主菌的氯离子通道,对原核生物的氯离子通道有抑制作用.
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BmK CT对胶质瘤细胞侵袭的影响及机制研究
目的 蝎氯毒素(Cltx)能特异性阻断神经胶质瘤细胞的氯离子通道,Cltx类似物(BmK CT)是从东亚钳蝎中纯化出来的第1个Cltx类似物.该文旨在研究BmK CT对大鼠胶质瘤细胞(C6)侵袭的影响及作用机制. 方法 采用Transwell 小室评价BmK CT对C6细胞侵袭能力的影响,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BmK CT对基质金属蛋白酶2(MMP2)基因和蛋白表达水平的影响. 结果 BmK CT可显著抑制C6细胞的侵袭能力(P＜0.05)；C6细胞经BmK CT处理后,MMP2的mRNA表达未见明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05);但MMP2的分泌受到显著抑制(P＜0.05).结论 BmK CT可显著抑制C6细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP2分泌水平降低有关.
