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单克隆抗CK10及CD31抗体免疫组织化学染色在羊水栓塞法医病理学诊断中的应用
羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE)是分娩过程中一种罕见而严重的并发症,其发生率为1/500000,但病死率>80%[1].诊断羊水栓塞的常规方法主要进行尸体解剖,通过苏木素-伊红(HE,染色来检验肺小动脉、毛细血管中是否存在羊水中的有形成分,如角化鳞状上皮、毳毛、黏液和胎粪等.其中角化鳞状上皮检出率较高,而其他物质的检出率低[2].由于尸体解剖不及时及切片制作等原因,可导致组织自溶或血管内皮脱落于血管管腔内,给诊断带来一定的困难.因此,我们应用抗CK10、CD31单克隆抗体,对15例死亡时间在3~7 d的羊水栓塞病例的肺组织切片进行Ultrasensitive SP免疫组织化学染色,采用生物素标记的第二抗体与链霉素抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及底物色素混合液来进行检验.
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从蛋白质相互作用研究方法的发展看人们认识事物的过程
1 酶联免疫吸附检测法简单的研究两蛋白质相互作用的是,在体外验证两蛋白质的相互作用,如验证所制备的抗体是否特异性地与抗原结合,这里要求方法:一要能检测到结合作用,二要排除非特异性结合,这样人们就建立了酶联免疫吸附检测法(ELISA).原理是,将已知抗原固定在96孔塑料板上,用不同稀释度的抗抗原的第一抗体溶液与其结合,经洗涤去除非特异性结合分子后,加入用辣根过氧化物酶标记的抗第一抗体的第二抗体,洗涤后再加入辣根过氧化物酶的底物,底物被酶作用后就转变为有颜色的物质.这样只有在第一抗体与抗原结合了之后才会有后面的二抗和底物的逐步结合,也才会有颜色的变化.由于这种方法是用酶标二抗和底物呈色,所以有放大效应,灵敏度较高.若抗体的特异性和亲和性非常好,ELISA法就可以用来检测实验样品和临床标本中的抗原水平,例如,临床上乙型肝炎5项指标的检测就是用这种方法.
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间接荧光抗体试验在主要寄生虫病监测中的应用进展
间接荧光抗体试验(IFAT)是通过将荧光素与抗人免疫球蛋白或其他第二抗体在不影响抗体免疫特性的情况下,用化学方法结合起来,制备成荧光抗体.当作为检测用的未标记的抗原(或抗体)与待测标本中相应的抗体(或抗原)结合成抗原-抗体复合物时,加入荧光抗体与之结合形成免疫荧光复合物,即可在荧光显微镜下显示亮绿色荧光,从而间接地显示出待测标本中存在着相应抗体(或抗原).IFAT早用于寄生虫病的血清学检测始于上世纪60年代,随着寄生虫抗原制备方法的不断完善和荧光标记技术的成熟以及荧光显微镜的普及,IFAT的用途不断拓展.限于篇幅,本文仅对IFAT在血吸虫病、疟疾和丝虫病监测中的应用进展进行综述.