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POLH基因实时荧光定量PCR检测条件的建立
研究表明,环境化学污染物可以引起各种类型的DNA损伤,而POLH基因与DNA损伤所引起的细胞内反应即DNA的跨损伤合成(translesion synthesis,TLS)有关.因此,有必要寻找出一种敏感度极高的方法来检测POLH基因在mRNA水平上的表达变化,从而为探讨POLH基因在环境化学污染物所诱导的跨损伤DNA合成中的分子作用机制提供相应的线索.
关键词： SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR POLH -
氢醌对L-02肝细胞内POLH基因mRNA表达的影响
目的 观察不同浓度氢醌(HQ)对L-02肝细胞内POLH基因mRNA表达的影响,旨在探讨HQ对人体细胞毒性作用的分子机制.方法 应用四甲基偶氮唑盐比色法检测不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320 μmol/L)HQ作用24 h后对L-02肝细胞存活率的影响;应用带有SYBR GreenⅠ的实时荧光定量聚合酶链反应技术研究不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L)HQ对L-02肝细胞内POLH基因mRNA表达的影响.结果 在0～80 μmol/L的范围内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05),当染毒剂量超过160 μmol/L时,其存活率则明显地下降(P＜0.01);在HQ染毒剂量低于80 μmol/L的范围内,POLH基因mRNA表达有随着剂量的增加而增加的趋势,当HQ的剂量达到160 μmol/L时,POLH基因mRNA的表达则有所降低,但仍高于对照组.结论 HQ可以诱导L-02肝细胞内POLH基因在mRNA水平上的表达改变.
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POLH mRNA作为辐射损伤分子生物标志物的可行性研究
目的:研究受γ射线照射后人外周血中POLH mRNA的表达变化,为确立POLH mRNA作为新的辐射损伤分子生物标志物提供实验依据.方法:采取3名健康成人的外周血,利用60Co γ放射源分别对其进行0.5、1、2、4、6、10 Gy照射,在照射后2、4、8、12和24 h收集各个剂量组受试者全血,提取总RNA,利用TaqMan探针实时定量PCR法,检测POLH mRNA的相对表达量.另收集30名不同年龄段(男女各占一半)的健康人外周血作为本底组,检测POLH mRNA在不同个体间的表达差异.结果:照射后2h,仅10 Gy照射组POLH mRNA表达增加,其余各照射组无显著变化;照射后4、8、12和24 h,在0～2Gy范围内,POLH mRNA表达量随照射剂量的增加而增加,呈现明显的剂量依赖效应,大于2 Gy照射后增加趋势接近饱和.照射后4～12h随时间的增加表达量也不断增加,于12h达到峰值.在对健康人群本底表达水平的分析中发现,POLH mRNA表达水平不受性别、年龄影响,在不同个体间相对均一,波动范围小.结论:POLH mRNA可由为辐射诱导表达,在一定时间和剂量范围内呈现明显的剂量依赖关系,且在不同个体之间本底表达水平相对均一,具备作为辐射损伤分子生物标志物的潜力.
