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低剂量环磷酰胺预先作用的抗肿瘤效应
以正常及接种瘤细胞的昆明种小白鼠为实验模型,用低剂量环磷酰按(0.2mg/kg,简称为D1)预先刺激,观测给小鼠皮下种植S180肉瘤细胞后肿瘤的发生、发展及荷瘤小鼠肝脏自由基代谢的情况.结果证明D1可以使肿瘤发生率降低,若荷瘤小鼠在大剂量常规化疗前预先给予D1处理,可使肿瘤净重减轻得更明显(P＜0.01),经自由基生物活性测定,SOD及GSH-Px酶的活性增高(P＜0.05),MDA的含量也有降低的趋势,说明D1对小鼠种植肿瘤具有明显抑制作用,其机理可能与自由基代谢或其它因素(免疫功能)有关.
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含人谷胱苷肽过氧化物酶基因重组腺病毒的构建
目的 构建含人谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法.方法 从人血中分离出白细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法获得人GPx-1和人GPx-2的全长cDNA,克隆到pcDNA3.1+中,构建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-2载体,酶切和基因测序鉴定阳性克隆；采用酶切法把GPx-1和GPx-2基因克隆至入门载体pENTR1A中,构建pENTR1A-GPx-1和pENTR1A-GPx-2载体.采用LR反应,体外重组pENTR1A-GPx-1或pENTR1A-GPx-2和pAd/CMV/V5-DEST,得重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2.PCR和序列测定鉴定重组腺病毒载体.293A细胞中包装和扩增GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒.结果 获得GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒载体和重组腺病毒.结论 成功构建了pAd/CMV/V5-DEST GPx-1和pAd/CMV/V5 DEST-GPx-2重组腺病毒载体,并在293A中获得该重组腺病毒,为进一步研究人GSH-Px基因在基因治疗中的作用奠定了基础.
关键词： 重组腺病毒 谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px) 活性氧 基因治疗
