首页 > 文献资料
-
单纯性马蹄内翻足易感基因位点筛查
目的 将人类单纯性马蹄内翻足(ICTEV)易感基因初步定位,为进一步对其克隆提供基础依据.方法 选取与肢体发育、关节翻转及与软骨发育相关的基因作为候选基因,在基因内或其附近选取微卫星标记,应用PCR-短串联重复序列(STR)方法扩增微卫星片段,对84个ICTEV核心家系的252名成员进行基因型分析,并进行遗传连锁不平衡检验(TDT).结果 Ⅸ型胶原COL9A1基因(6q12-13区域)内及其附近的2个位点-D6S348及509-882经TDT检验表明,此2个位点与ICTEV有相关性(分别χ~2=42.15,χ~2=31.18,P＜0.05);其他位点经TDT检验,不存在连锁不平衡(均P＞0.05).结论 COL9A1基因可能是ICTEV的候选基因,从而将ICTEV易感基因初步定位于COL9A1基因所在的染色体区域6q12-13.
-
单纯性马蹄内翻足模型鼠足踝部组织中Col9a1基因表达的研究
目的：研究Col9a1基因在单纯性马蹄内翻足（idiopathic congenital talipes equinovarus，ICTEV）模型鼠足踝部组织的表达规律。方法：制作ICTEV模型，分别取模型组及对照组大鼠足踝部组织，采用免疫荧光染色及免疫组化染色技术检测Col9a1蛋白的表达。结果：模型组足踝部组织中Col9a1蛋白表达水平高于对照组（P＜0.05），主要分布在软组织和软骨膜。结论：Col9a1基因在ICTEV模型大鼠足踝部组织的表达升高可能与ICTEV畸形的产生有关。
-
COL9A1基因在单纯性马蹄内翻足中的表达及其多态性分析
目的 COL9A1基因是位于单纯性马蹄内翻足(IC7EV)易感区域(6q12-13)的已知基因.本研究探讨COL9A1基因在ICTEV患者中的表达及其单核苷酸多态(SNP)位点在ICTEV和正常人中的分布情况.方法 应用免疫组化方法检测25例ICTEV患儿及5例正常对照组肌肉及肌腱组织中COL9A1的表达;应用限制性片段长度多态性技术结合测序法,分析118例ICTEV患者及100名正常人COL9A1基因的2个SNP位点基因型.结果 88%(22/25)的ICTEV患者COL9A1蛋白表达阳性,明显高于正常对照组.位于COL9A1基因编码区的SNP位点rs1135056的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布差异有统计学意义(P<0.05):ICTEV组G等位基因频率高于对照组;与对照组相比,AA基因型频率降低,AG、GG基因型频率增高.结论 COL9A1基因在ICTEV中高表达,rs1135056多态位点G等位基因和ICTEV的发生相关.
-
GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发生中的调控机制
目的 探讨在单纯性马蹄内翻足发生过程中GLI3基因的凋控机制.方法 构建荧光素酶报告基因表达载体,分析大鼠Gli3基因5′侧翼启动子区域的活性.用P-Match软件预测Gli3基因上游序列中转录因子的结合位点,并通过染色质免疫沉淀实验、凝胶迁移实验验证.用RNA干扰实验以及构建Hoxd13表达载体,观察其在L6细胞中对Gli3基因表达的影响.结果 在大鼠Gli3基因序列的启动子区域发现2个Hoxd13的结合位点,染色质免疫沉淀和凝胶迁移实验证实Hoxd13结合于结合位点2上.Hoxd13表达下调时,Gli3基因表达明显上调.Hoxd13基因表达上调时,Gli3基因则表达下调.结论 在大鼠胚胎肢体发育中,Hoxd13蛋白可能与Gli3基因启动子区的Hoxd13结合位点2结合,调控Gli3的表达.
-
GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发病机制中的作用
目的 探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足(idiopathic congenital talipes equinovarus,ICTEV)的相关性.方法 应用变性梯度凝胶电泳技术检测GLI3基因编码区的突变.用逆转录-PCR方法研究GLI3基因在1CTEV患者下肢的表达情况.构建ICTEV大鼠模型,应用实时定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹(Western blotting)方法研究Gli3基因在ICTEV模型鼠下肢肌肉组织中的表达.结果 在84例ICTEV患者外周静脉血中未发现GLI3基因第1～8外显子以及第13外显子存在突变.在ICTEV患者及正常人下肢拇长屈肌中均未检测到GLI3基因的表达.不论在mRNA水平还是在蛋白质水平,Gli3基因在ICTEV模型胎鼠下肢组织中的表达均明显高于正常对照胎鼠.结论 GLI3基因的编码区突变可能不是ICTEV发病的主要原因,但GLI3基因的表达异常与马蹄内翻足的发病可能有关.
-
GLI3基因与单纯性马蹄内翻足的关联分析及其突变筛查
目的 对GLI3基因与单纯性马蹄内翻足进行关联分析和突变筛查,探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足的相关性.方法 应用限制性片段长度多态性分析技术,分析84个单纯性马蹄内翻足核心家系中GLI3基因内两个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点的基因型,并应用ETDT软件统计分析各SNP位点基因型与单纯性马蹄内翻足的关联;应用变性梯度凝胶电泳技术对103例单纯性马蹄内翻足患者GLI3基因的第9至12外显子进行突变筛查.结果 经ETDT分析,位于GLI3基因第4外显子的cSNP rs846266差异无统计学意义(χ2=3.3582,P＞0.05);第14外显子的cSNP rs929387差异有统计学意义(χ2=7.2466,P＜0.05),在单纯性马蹄内翻足核心家系中存在传递不平衡;发现1例患者及其母亲的第9外显子有108(G→A)的同义点突变.结论 GLI3基因与单纯性马蹄内翻足相关,其第 9至12外显子可能并非该病的突变热点.
