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登革病毒实时荧光PCR快速检测技术研究
目的 建立Taqman MGB实时荧光PCR技术快速检测登革病毒.方法 利用Taqman MGB技术,根据登革病毒3'端非编码区的一段高度保守序列,设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针,以登革热毒株作为标准,以乙脑毒株作对照,建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法.并对8份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT-PCR及荧光PCR扩增.结果 RT-PCR检测8份临床血清标本,2份阳性,阳性率为25%.实时荧光PCR检测登革病毒cDNA灵敏度为0.17pg/μl,病毒液灵敏度为10-5 TCID50,与乙脑病毒无交叉反应,检测8份临床血清标本,5份阳性,阳性率为62.5%.从RNA提取到检测结果仅需4 h.结论 Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强,可作为登革病毒的快速检测方法,应用于登革热的临床早期诊断.
关键词： 登革病毒 RT-PCR Taqman MGB 实时 PCR -
多发性骨髓瘤患者骨髓液中 miRNA-21、miRNA-15a和 miRNA-16的表达及其临床意义分析
目的：观察和分析多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓液中微小 RNA（miRNA）-21、miRNA-15a 和 miRNA-16的表达及其临床意义。方法选取50例 MM 患者作为病例组，根据治疗效果将其分为初治组（19例）、难治组（18例）和缓解组（13例），选取20例非恶性血液疾病患者作为对照组。对各组患者骨髓液中的 miRNA-21、miRNA-15a 和miRNA-16表达水平和血清β2微球蛋白（β2-MG）水平进行检测和比较。结果各组患者骨髓液中 miRNA-21、miR-NA-15a、miRNA-16表达水平的差异均有统计学意义（F＝37．839、419．707、445．998，P ＜0．05）。其中，难治组患者骨髓液中 miRNA-21表达水平显著高于其他三组，miRNA-15a、miRNA-16表达水平显著低于其他三组，初治组患者骨髓液中 miRNA-21表达水平显著高于缓解组或对照组，miRNA-15a、miRNA-16表达水平显著低于缓解组或对照组，以上差异均有统计学意义（P ＜0．05）；直线相关分析显示，MM 患者血清β2-MG 水平与骨髓液中 miRNA-21表达水平呈正相关关系（r＝0．599，P ＜0．05），与 miRNA-15a 表达水平（r ＝－0．829）、miRNA-16表达水平（r ＝－0．698）呈负相关关系（P ＜0．05），多元线性回归分析结果显示，MM 患者的血清β2-MG 水平与骨髓液中 miRNA-15a 表达水平呈负相关关系（标化相关系数＝－0．976，t＝－5．838，P ＜0．05）。结论MM 患者骨髓液中的 miRNA-15a、miRNA-16和 miRNA-21表达水平与患者对化疗的反应性和肿瘤负荷具有相关性，可用于评价患者病情的进展、预测治疗效果和患者的预后。
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质粒DNA中宿主菌基因组DNA残留检测方法的比较
目的 对检测质粒DNA中宿主菌基因组DNA含量的Southern blot和Real-time PCR法进行比较.方法 PCR扩增宿主菌染色体DNA的16SrRNA片段,以地高辛标记回收的目的 片段为探针,对提取的质粒pcDNAH进行Southern blot.同时根据16SrRNA基因序列设计探针,建立Real-time PCR反应体系和标准曲线,分别检测质粒中宿主菌基因组DNA的含量.结果 应用Southem blot和Real-time PCR检测质粒peDNAH中宿主菌基因组DNA的含量,结果均符合WHO相关标准.结论 两种检测方法各有优缺点,均可用于检测质粒DNA中宿主菌基因组DNA的残留,可根据不同情况,采用不同方法或配套使用.
关键词： 质粒 DNA 宿主菌 Southern blot 实时 PCR -
荧光 MGB探针实时 PCR检测经典型苯丙酮尿症的基因突变
[目的]探讨荧光 MGB探针实时 PCR技术检测经典型苯丙酮尿症的基因突变.[方法]运用荧光 MGB探针实时 PCR检测经典型苯丙酮尿症 33例 ,一级亲属 43例 ,正常对照 30例.检出 R243Q突变的 PCR标本进行测序验证.[结果]发现 11例 PKU具有 R243Q突变 , 突变频率为 33% , 其中突变纯合子 4例 , 突变杂合子 7例 , 一级亲属检出 R243Q杂合子突变 9例 , 正常人未发现 R243Q突变.所有突变均经测序证实.[结论]PAH基因第 7外显子的 R243Q点突变在中国 PKU患者中有较高的突变率 ; 荧光 MGB探针实时 PCR是 PKU的基因诊断良好技术平台.
