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登革病毒实时荧光PCR快速检测技术研究
目的 建立Taqman MGB实时荧光PCR技术快速检测登革病毒.方法 利用Taqman MGB技术,根据登革病毒3'端非编码区的一段高度保守序列,设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针,以登革热毒株作为标准,以乙脑毒株作对照,建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法.并对8份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT-PCR及荧光PCR扩增.结果 RT-PCR检测8份临床血清标本,2份阳性,阳性率为25%.实时荧光PCR检测登革病毒cDNA灵敏度为0.17pg/μl,病毒液灵敏度为10-5 TCID50,与乙脑病毒无交叉反应,检测8份临床血清标本,5份阳性,阳性率为62.5%.从RNA提取到检测结果仅需4 h.结论 Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强,可作为登革病毒的快速检测方法,应用于登革热的临床早期诊断.
关键词： 登革病毒 RT-PCR Taqman MGB 实时 PCR -
应用Taqman MGB定量PCR技术建立HTLV-I前病毒的检测体系
建立了一种快速检测HTLV-I前病毒的荧光定量方法.利用HTLV前病毒DNA序列设计特异性Taqman MGB探针及引物对目标DNA片段进行实时检测,用含目标片段质粒构建标准曲线.该定量检测方法在103～107copy/μL范围内与ct值呈良好线性关系(R2可达0.999),低检测浓度为5copy/μL.利用该系统对献血者血液标本进行HTLV前病毒初筛确认及定量检测,结果表明该方法重复性良好,特异性高,适用于献血者和临床标本的检测和确认,亦可用于对HTLV病毒载量与成人工细胞白血病等疾病的关联性进行研究.
关键词： HTLV-I前病毒 Taqman MGB 荧光定量PCR -
登革病毒TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
目的 建立登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法及应用于临床.方法 根据1～4型登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列,设计一套型通用的引物和TaqMan MGB探针,以4个血清型登革病毒标准株为标准,以日本乙脑病毒和丙肝病毒作阴性对照,以包含登革病毒2型标准株(DENV-2 NGC株)3’非编码区349 bp片段的质粒DNA作标准品,对引物和TaqMan MGB探针的特异性、灵敏度进行分析,从而建立登革病毒实时荧光定量PCR检测方法.用该法对登革病毒野毒株和10份登革病毒患者血清进行检测.结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测的1～4型登革病毒标准株及野毒株均为阳性,日本乙脑病毒和丙肝病毒均为阴性；检测灵敏度可达到每反应2个基因拷贝；检测的10份登革患者血清样本中,8份检测结果为阳性.结论 TaqMan MGB实时荧光定量PCR方法是一个快速、特异性强、敏感性高的检测登革病毒的方法,适用于登革病毒的临床早期诊断.
关键词： 登革病毒 Taqman MGB 实时定量RT-PCR 检测
