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转CpTI基因大米在五指山小型猪体内消化稳定性的初步研究
目的 建立五指山小型猪在体消化稳定性模型,评价转CpTI大米的胃肠消化稳定性.方法 在五指山成年猪体内同时安置胃、肠瘘管,通过经口喂饲途径,以大豆作为阳性对照,测定不同时间点消化液的pH,采用蛋白凝胶电泳法分析测定不同时间点消化产物中的蛋白片段,比较转CpTI大米和亲本大米消化产物的区别.结果 给样后胃液pH迅速中和至6.0左右,以后逐步降低,在4～6h后又开始回升,大豆引起胃液pH下降和回升时间均较米粉晚;13×103、17×103、34×103和50×103是大豆中几种相对消化稳定的蛋白片段,在5～6h的胃肠液中仍然能检测出高表达,其中50×103、34×103、17×103三个蛋白片段呈现胃液、肠液消化稳定性,而13kD呈现胃液消化稳定性;米粉给样0.25h后胃液中未检出任何耐受蛋白酶消化的片段或亚基,而亲本明恢86米粉和转CpTI基因米粉比较,无论是胃液或肠液中蛋白消化情况均无明显区别.结论 利用五指山小型猪建立的在体消化稳定性模型是可行的,转CpTI基因米粉与亲本米粉在五指山小型猪胃液、肠液中的消化稳定性具有等同性.
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食物蛋白质消化稳定性和热稳定性研究
目的 建立体外模拟胃肠液消化稳定性试验和热稳定性试验方法,确定试验中的阳性和阴性参考蛋白质.方法 在体外模拟胃肠液消化环境和热加工处理环境,通过SDS-PAGE凝胶电泳研究常见食物致敏原(鸡卵清蛋白OVA、牛β-乳球蛋白β-LG)、不常见食物致敏原(牛血清白蛋白BSA)和非致敏原(大豆脂肪水解酶LPE、马铃薯酸性磷酸酶PAP)在其中各观察时间点的降解情况.结果 OVA在模拟胃肠液中60min不降解;β-LG在模拟胃液中60min不降解稳定存在,但在模拟肠液中30min内完全降解;BSA在模拟胃液中30min内完全降解,在模拟肠液中60min部分降解;PAP在模拟胃液中15s即完全降解,LPE在30s内完全降解;而在模拟肠液中,PAP 60min完全不降解,LPE 60min大部分降解.在热稳定性试验中,OVA、β-LG、BSA60min内不降解,PAP 60min内完全降解.结论 模拟胃液消化稳定性和热稳定性试验中设OVA为常见致敏原对照、BSA为不常见致敏原对照、PAP为非致敏原对照,模拟肠液消化稳定性试验中设OVA为常见致敏原对照、BSA为不常见致敏原对照、LPE为非致敏原对照.并据此初步建立体外消化稳定性和热稳定性试验方法.
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转基因牛的重组人α-乳清白蛋白的离体和体外消化稳定性研究
目的 通过测定转人α-乳清白蛋白基因的克隆牛所表达的重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中的消化时间,并与人α-清白蛋白标准品在上述消化液中的消化时间相比较,判定该重组蛋白的消化稳定性,为其致敏性评价提供基础资料.方法 根据<转基因生物及其产品食用安全检测--模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法>消化人α-乳清白蛋白标准品和重组人α-乳清白蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析消化后的样品.结果 重组人α-乳清白蛋白在模拟胃液中0 s即被完全消化,模拟肠液中10 min内完全消化,在小型猪胃液和肠液中均在20 min内被完全消化.虽然完全消化的时间存在差异,但均在20 min内.重组蛋白与人α-乳清白蛋白标准品的消化稳定性相似.结论 重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中均不具有消化稳定性.
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转G10evo和Cry1Ab/Cry2Ab基因玉米GAB-3外源基因表达蛋白的消化稳定性
目的 评价转G10evo、Cry1Ab/Cry2Ab基因抗虫耐草甘膦玉米(GAB-3)中的外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃肠液中的消化稳定性.方法 根据国家标准建立体外模拟胃肠环境消化体系,对照或样品均以5g/L进行模拟胃液消化,以2 g/L进行模拟肠液消化.于反应0s、15s、2 min、30 min和60 min时取出 200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应.然后将消化后的对照及样品进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、染色并使用凝胶成像系统观察结果.结果 作为稳定对照的大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,STI)在模拟胃肠液中60 min未被消化,作为不稳定对照的酪蛋白(α-casein)在模拟胃肠液中15s内全部消化.外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃液中2 min内完全消化,在模拟肠液中30 min内完全消化.结论 转基因玉米(GAB-3)的外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃肠液中不具有消化稳定性,容易被降解.
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重组人乳铁蛋白在体外模拟胃肠环境中稳定性研究
目的 研究重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rHLF)分别在体外模拟胃液和模拟肠液中的消化稳定性.方法 采用模拟胃液和模拟肠液在体外建立模拟胃肠环境消化体系,测定重组人乳铁蛋白在胃肠环境中的稳定性.重组人乳铁蛋白在模拟胃、肠液中的浓度分别为5.0和2.0 mg/ml.在重组人乳铁蛋白与模拟胃/肠液反应后的0、15、30 s和1、2、5、10、20、30、60 min取样,根据SDS-PAGE凝胶电泳结果,判断重组人乳铁蛋白在模拟胃、肠液环境中的稳定性.结果 重组人乳铁蛋白在体外模拟胃液中2 min内降解,在模拟肠液中60 min内不能完全降解.结论 重组人乳铁蛋白在体外模拟人体胃肠环境中易被降解消化.
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转Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因“双抗12-5”玉米外源基因重组蛋白的消化稳定性研究
目的 评价转Cry1Ab/ Cry2Aj、G10evo(EPSPS)基因抗虫耐草甘膦玉米“双抗12-5”中的外源基因重组蛋白在模拟胃肠液中的消化稳定性.方法 根据国家标准建立体外模拟胃肠环境消化体系,样品或对照都以5 mg/ml的浓度模拟胃液消化,2 mg/ml的浓度模拟肠液消化.分别于反应0s、15s、2 min、30 min和60 min时取出200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应,再进行十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、染色并观察结果.结果 大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,STI)在模拟胃、肠液中60 min仍不能被全部消化,酪蛋白(α-casein)在模拟胃、肠液中0～15 s内全部消化,Cry1Ab/Cry2Aj重组蛋白在模拟胃、肠液中0-15 s内完全消化,G10evo(EPSPS)重组蛋白在模拟胃液中0-15 s内全部消化,在模拟肠液中2～30 min内全部消化.结论 转Cry1Ab/Cry2Aj、G10evo(EPSSP)基因玉米的外源基因重组蛋白在模拟胃、肠液中不具有消化稳定性,容易被降解.
