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转基因动物的食用安全性评价
转基因食品商业化进入市场前必须经过食用安全性和环境安全性评价.FAO/WHO专家提出,转基因动物的食用安全性评价基本上可以参照转基因植物的食用安全性评价程序,但要进行个案分析.鉴于动物与植物特性的不同,转基因动物的安全性评价又有其特异之处.本文对国内外转基因动物的食用安全性评价概况和进展作一综述.
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纤维桩树脂核修复牙体大面积缺损的临床应用
多年来临床上对牙体大面积缺损患者往往都是进行完善的根管治疗后,需要用桩核塑形,后冠修复,使得终完成的修复体可以承载正常的(牙合)力.而制作桩核的材料一般采用各种金属.随着多年的临床应用,金属桩的缺陷显现出来,如不透光、使牙龈染色、致敏性、影响磁共振成像等,另外由于金属的机械特性与牙体差异较大,金属桩修复的根管治疗牙常出现破坏性牙根折.近年来我科引进了纤维桩树脂核技术,笔者应用纤维桩树脂核进行牙体大面积缺损的修复,收到一定效果,现总结如下.
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镍铬合金修复体对患者牙龈组织致敏性的研究
目的：探讨镍铬合金修复体对患者牙龈组织的致敏性。方法：选择行镍铬合金冠/桥修复固定义齿2～5年的患者30例，取镍铬复体患者牙龈组织及正常对照牙龈组织，运修用免疫组织化学SP (Streptavidin-peroxidase)法检测镍铬修复体患者牙龈组织以及正常牙龈组织中HLA-DR蛋白的表达。结果：镍铬修复体患者牙龈组织中HLA-DR蛋白的表达明显高于正常牙龈组织(P<0.05)， HLA-DR的阳性表达与患者性别、年龄及修复体类型均无直接关系(P>0.05)。结论：镍铬合金可能对牙龈组织有一定的致过敏性，可使修复体周围组织处于炎症激活状态。
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LLNA:BrdU-ELISA改良法在化学物/化妆品皮肤刺激性和致敏性评价中的应用
目的 探讨LLNA:BrdU-ELISA改良法在化学物/化妆品皮肤刺激性和致敏性评价中的应用.方法 8～10周龄雌性BALB/c小鼠随机分组(4只/组),将化学物,化妆品产品对小鼠双耳连续染毒3d,第5天腹腔注射标记液BrdU,第6天耳廓称重并分离颌下淋巴结制取细胞悬液,ELISA法测定细胞增殖.结果 α-己基肉桂醛(25％、50％)、柠檬醛(10％、25％、50％)、异丁香酚(10％、30％)氯仿(5％、50％、100％)、正己烷(100％)、3号粉底霜和5号烫发剂具有刺激性,其他组均无刺激性;丁子香酚(25％、50％)、α-己基肉桂醛(25％、50％)、异丁香酚(3％、10％、30％)、柠檬醛(10％、25％、50％)、氯仿(50％、l00％)、3号粉底霜和5号烫发剂为致敏阳性,其他组均为致敏阴性.结论 LLNA:BrdU-ELISA改良法应用BALB/c小鼠可较好地评价化妆品的皮肤刺激性和致敏性,并对化妆品中风险化学物苯、氯仿和正己烷的皮肤刺激性和致敏性进行了评估,完善了相关毒理数据.
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转基因植物致敏性评价方法研究现状
过敏反应又称变态反应(allergy),是指人体接触特异性抗原后由于过度的免疫保护而导致生理功能紊乱和组织损伤的反应.流行病学调查显示,随着工业化的发展过敏性疾病在全球范围内有明显的增加趋势,并成为发达国家和发展中国家面临的一项重要的健康问题[1,2].
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转基因食品致敏性评价
转基因食品又称基因改性食品,是基因工程技术迅速发展的产物,在给人类带来更加丰富的食品供应和巨大的经济利益的同时,转基因食品的安全性问题成为一个研究热点,其中,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一,特别是如果转入的蛋白质是新蛋白质时,这些异性蛋白质就有可能引起食物过敏,对儿童和体质过敏的人更是如此.一个典型的例子就是对巴西坚果过敏的人对转入巴西坚果基因后的大豆也产生了过敏[1].因此,转基因食品致敏性评价研究日益受到人们的重视.
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应用于纺织品中的纳米铜皮肤刺激性和致敏性的研究
目的 分别使用3D皮肤模型和皮肤致敏性替代法及传统动物实验研究纳米铜的皮肤刺激性和致敏性.方法 采用EpiKutis 3D皮肤模型研究纳米铜的皮肤刺激性.皮肤致敏性替代法采用小鼠局部淋巴结试验:LLNA:BMU-ELISA方法和LLNA:DA方法研究纳米铜的致敏性;同时根据GB/T 21604-2008和GB/T 21608-208化学品皮肤刺激性和致敏试验方法研究纳米铜应用液的皮肤刺激性和致敏性.结果 3D皮肤模型皮肤刺激性试验结果表明1％纳米铜应用液(69 mg/L)和0.25％纳米铜应用液(17.2 mg/L) ET50值均大于24 h,两者均无刺激性.纳米铜应用液(6.9 g/L)的ET50值为14.86 h(ET50值为12 ～24 h之间),刺激性属于非常温和.LLNA:BrdU试验结果表明:纳米铜组小鼠耳肿胀、耳重、淋巴结重量和BrdU标记指数与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05),表明纳米铜应用液刺激性为阴性.SI值为1.3＜1.6,为致敏性阴性.LLNA:DA试验结果表明:纳米铜组小鼠耳肿胀、耳重、淋巴结重量和ATP发光值与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05),表明纳米铜应用液刺激性为阴性.SI值为1.3＜1.8,致敏性阴性.传统家兔皮肤刺激性和致敏性试验结果表明,6.9 g/L纳米铜应用液无刺激性.结论 3D皮肤模型皮肤刺激性试验和皮肤致敏性替代法与传统皮肤刺激性和致敏试验结果一致,可对本试验中纳米材料刺激性和致敏性做出较好评价.
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食物蛋白质消化稳定性和热稳定性研究
目的 建立体外模拟胃肠液消化稳定性试验和热稳定性试验方法,确定试验中的阳性和阴性参考蛋白质.方法 在体外模拟胃肠液消化环境和热加工处理环境,通过SDS-PAGE凝胶电泳研究常见食物致敏原(鸡卵清蛋白OVA、牛β-乳球蛋白β-LG)、不常见食物致敏原(牛血清白蛋白BSA)和非致敏原(大豆脂肪水解酶LPE、马铃薯酸性磷酸酶PAP)在其中各观察时间点的降解情况.结果 OVA在模拟胃肠液中60min不降解;β-LG在模拟胃液中60min不降解稳定存在,但在模拟肠液中30min内完全降解;BSA在模拟胃液中30min内完全降解,在模拟肠液中60min部分降解;PAP在模拟胃液中15s即完全降解,LPE在30s内完全降解;而在模拟肠液中,PAP 60min完全不降解,LPE 60min大部分降解.在热稳定性试验中,OVA、β-LG、BSA60min内不降解,PAP 60min内完全降解.结论 模拟胃液消化稳定性和热稳定性试验中设OVA为常见致敏原对照、BSA为不常见致敏原对照、PAP为非致敏原对照,模拟肠液消化稳定性试验中设OVA为常见致敏原对照、BSA为不常见致敏原对照、LPE为非致敏原对照.并据此初步建立体外消化稳定性和热稳定性试验方法.
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化妆品安全性评价中小鼠局部淋巴结试验方法的改进
目的 改进小鼠局邵淋巴结买验(LLNA),建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的LLNA替代方法.方法 选取一种阴性物质:4-氨苯甲酸;三种致敏阳性物:2,4-二硝基氯苯(DNCB)、己基肉桂醛(HCA)和2-氨基酚(2-APC);以及两种刺激阳性物:氢氧化钾(KOH)、十二烷基硫酸钠(SIS).按常规LLNA方法对雌性Balb/c小鼠进行染毒,测量小鼠耳缘厚度并称量耳廓重量,于第6天获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性.结果 受试剂量氢氧化钾、十二烷基硫酸钠和2,4-二硝基氯苯在0.5%以上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),可判定为对皮肤有刺激性,2.氨基酚和己基肉桂醛均无刺激性.三种致敏物在致敏试验中均呈阳性,但三指标的敏感性略有不同.已基肉桂醛,2,4-二硝基氯苯,2.氨基酚均可引起淋巴结重量增加和淋巴细胞计数增加(P<0.05);中剂量以上组己基肉桂醛和2,4-二硝基氯苯和高剂量2-氨基酚的CCK-8检测均见淋巴细胞增殖明显.结论 以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性.
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BN大鼠致敏动物模型研究
目的 建立经腹腔注射途经给予造模致敏原的BN大鼠致敏动物模型.方法 分别在实验第1、5和10天,经腹腔注射给予不同性别(雌性和雄性)和不同周龄(4周龄和8周龄)的BN大鼠,不同剂量(1.00、0.10和0.01mg)的造模致敏原——卵清蛋白(OVA),观察35天.分别于第28、35天内眦取血分离血清,用ELISA方法检测血清中OVA特异性IgE.结果 与阴性对照组相比,雌性8周龄BN大鼠中、高剂量组第28、35天血清中OVA特异性IgE浓度显著升高(P＜0.05)；雄性8周龄BN大鼠低、中剂量组血清中OVA特异性IgE浓度在第28天显著升高(P＜0.05),高剂量组血清中OVA特异性1gE浓度在第35天显著升高(P＜0.05)；雄性4周龄BN大鼠,高剂量组血清中OVA特异性ⅠgE浓度在第35天显著升高(P＜0.05).结论 经腹腔注射途径给予不同性别和周龄的BN大鼠不同剂量的OVA,雌性大鼠比雄性大鼠更敏感；8周龄大鼠比4周龄大鼠更敏感；0.10mg或1.00mg的致敏剂量较适合.因此,选用雌性8周龄BN大鼠,经腹腔注射给予0.10mg或1.00mgOVA,35天后即可建立比较理想的BN大鼠致敏动物模型.
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皮肤致敏性检测中替代方法的研究进展
鉴于动物保护,3R原则的日益提倡,目前发展了很多传统化学物致敏性检测方法的替代方法,本文将这些替代方法分为体内替代方法(如局部淋巴结法等),体外替代方法(如基因标志物,肽反应试验,细胞模型,人工皮肤/重组模型,结构活性关系分析等),并对这些替代方法及其目前的研究进展做一综述.
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转基因牛的重组人α-乳清白蛋白的离体和体外消化稳定性研究
目的 通过测定转人α-乳清白蛋白基因的克隆牛所表达的重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中的消化时间,并与人α-清白蛋白标准品在上述消化液中的消化时间相比较,判定该重组蛋白的消化稳定性,为其致敏性评价提供基础资料.方法 根据<转基因生物及其产品食用安全检测--模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法>消化人α-乳清白蛋白标准品和重组人α-乳清白蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析消化后的样品.结果 重组人α-乳清白蛋白在模拟胃液中0 s即被完全消化,模拟肠液中10 min内完全消化,在小型猪胃液和肠液中均在20 min内被完全消化.虽然完全消化的时间存在差异,但均在20 min内.重组蛋白与人α-乳清白蛋白标准品的消化稳定性相似.结论 重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中均不具有消化稳定性.
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重组人乳铁蛋白致敏性的初步研究
目的 初步评价牛乳腺生物反应器表达的重组人乳铁蛋白(rhLf)的致敏性.方法 通过生物信息学分析和消化稳定性试验了解rhLf致敏的可能性.结果 生物信息学分析显示rhLf与已知致敏原乳转铁蛋白和卵转铁蛋白有序列同源性,与Asp f2、Ole e 10和Ole e9存在结构相似性.消化稳定性试验显示rhLf在胃液中易被消化成小片段,在肠液中不易被消化.结论 rhLf具有一定的潜在致敏可能性.
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重组人α-乳清白蛋白潜在致敏性的生物信息学预测
目的 通过生物信息学分析预测牛乳腺生物反应器表达的重组人α-乳清白蛋白(rhLA)的致敏性.方法 使用在线致敏原数据库(The Allergen Online Database)、致敏蛋白结构数据库(Structural Database of Allergenic Proteins)和食品安全致敏原数据库(Allergen Database for Food Safety),分析目标蛋白与已知致敏原的序列或结构相似性.结果 rhLA致敏性的生物信息学分析结果显示,rhLA与已知致敏原牛α-乳清白蛋白、牛乳糖合酶B蛋白(致敏原Bos d 4)、鸡溶菌酶C(1,4-β-N乙酰胞壁质酶C、致敏原Gal d Ⅳ、致敏原Gal d 4)存在较高的序列或结构同源性.结论 rhLA具有潜在的致敏可能性.
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利用BN大鼠动物模型评价S86转基因大米的致敏性
为研究S86转基因大米的致敏性,用BN大鼠致敏动物模型进行研究.40只BN大鼠随机分为4组,每组10只,分别为:阳性对照组,转基因大米组,非转基因大米组及阴性对照组.分别在第0和第7天,通过腹腔注射给予阳性对照组的大鼠0.1 mg/ml卵清蛋白(OVA)1ml,其它各组在相同时间腹腔注射相同剂量的生理盐水.以AIN-93G为依据配制各组饲料,阳性对照组和阴性对照组大鼠饲以AIN-93G饲料,转基因大米组饲以含转基因大米粉的饲料,非转基因大米组饲以含非转基因大米粉的饲料,时间为6周.在第2次腹腔注射OVA后,取血分离血浆进行组胺测定.分别在第14、21、28、35、42天取血分离血清,测定IgG及IgE水平;此外,分别在实验前和实验后测定各组大鼠的血压.血清学实验结果显示转基因大米全食品喂饲没有激发IgG及IgE反应,而OVA(阳性对照组)激发了明显的IgG及IgE反应;转基因大米组的组胺水平与阴性对照组及亲本对照组相比差异没有显著性,而阳性对照组组胺水平升高.另外转基因大米没有引起大鼠血压升高.该研究结果表明通过全食品喂饲的方式给予BN大鼠S86转基因大米没有发现该转基因大米对BN大鼠具有致敏性.
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StarLink玉米过敏事件与国际贸易
2000年底，美国、日本、韩国等国由转基因玉米StarLink引起的一系列安全性事件对国际贸易产生了一定的影响。 Cry9c是微生物蛋白质，此基因被加入StarLink玉米使之抗虫。Cry9c是Bt蛋白之一。1998年Aventis公司申请美国环保局(EPA)将StarLink用于食品，由于EPA未对它的致敏性作定论，于是仅批准它作动物饲料或工业用。 9月美国消费者组织在tacoshells中检出了Cry9c后，引起了恐慌。EPA召集了专家组研究StarLink玉米的致敏性，他们认为整体致敏的可能性“低”。有44名美国人自称食入StarLink玉米污染的食品后有发痒、恶心和过敏症状，专家认为其中14人的症状有可能与转基因玉米有关。 韩国食品和药品管理局(KFDA)自11月29日开始进行StarLink的检测工作，所有从美国进口的玉米都要进行检测。2000年12月18日韩国退回了2760吨从美国进口的含转基因StarLink的玉米。 韩国消费者保护市民同盟(CACPK)2000年12月从汉城饲料商店中采集了10种豆饲料，请韩国基因分析中心进行分析。结果表明两种豆饲料是遗传修饰的，一种是美国豆芽，一种是韩国大豆。CACPK建议政府尽早对市场上转基因食品及饲料进行调查。 StarLink玉米在日本是被禁止用于食品和饲料的。日本在农业部2000年12月18日宣布与美国签定了一项计划，从美国运往日本的玉米动物饲料在运输前要先进行检测，证实不含StarLink。2000年12月19日日本新闻机构说日本卫生部在美国运往日本的一批作为食品的玉米中发现了StarLink玉米，日本卫生部已让美国政府收回该批玉米1500吨。此次事件中有5份样品在美国检测为阴性，运至日本按双方认同的程序进行复检时发现样品中含StarLink。 日本是美国玉米的大进口国，每年进口400万吨食品用和1200万吨动物饲料用玉米。自从10月下旬一个消费者组织在从美国进口的食品及饲料用玉米中发现了微量的StarLink以来，购买量受到影响。 泰国FDA也对StarLink玉米采取了行动。玉米食品进口商必须表明他们的产品不含Cry9c。FDA正在起草针对StarLink玉米的法规。受到影响的食品包括：popcorn、冷冻婴儿玉米、tacoshells、玉米片、冷冻玉米等。泰国FDA说目前未发现泰国有StarLink玉米过敏病例。怀疑含StarLink的产品有88%已被退回，他说此玉米作为饲料是安全的，Cry9c蛋白不会通过食物链进入人体。(郑云雁编译自Medscape.com网站)
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青霉素类药物应用时的注意事项及配伍禁忌
自从1928年弗莱明发现了青霉素以来,作为物美价廉的抗生素广泛应用于临床已有数十年历史,虽然其后不断有新的抗生素被发现、被应用于临床,但作为抗生素的基础性药物和王牌品种,现在在基层医院及社区服务点,仍因其疗效确切,不良反应少、价格低廉被广泛使用.
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妇科手术患者术后眼结膜炎情况调查
目的 了解本医院妇科手术患者眼结膜炎感染情况,找出原因,以采取防控措施.方法 通过现场调查和临床检查方法,对本院发生的11例妇科手术后患者眼结膜炎事件进行了调查.结果 本医院在2008年11月14日-18日连续发生11例妇科手术病人眼结膜炎病例,经局部治疗,在5d内均得到恢复.经分析手术过程各种相关环节,排除了微生物感染的可能性,而是与术中使用防粘连的一次性耗材"粘停宁"致敏有关.结论 本次发生的手术患者眼结膜炎不属于医院感染,而是与致敏性一次性耗材有关,医院应加强对进入身体无菌部位的一次性耗材的管理.
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流式细胞术在小鼠局部淋巴结试验中的应用研究
目的 将流式细胞术应用到小鼠局部淋巴结实验(local lymph node assay,LLNA)中,期望建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的方法.方法 受试物分为溶剂对照[AOO(丙酮∶橄榄油=4∶1)]、阴性对照(NaCl)、致敏阳性物[己基肉桂醛(HCA)、2,4二硝基氯苯(DNCB)、2-氨基酚(2-APC)]、刺激阳性物[KOH、十二烷基硫酸钠(SLS)].采用8～10周龄16～22 g的雌性Balb/c小鼠76只,随机分为19个受试物剂量组,每剂量组4只小鼠.每种受试物分别设低、中、高3个剂量组,检测浓度分别为NaCl (100g/L、200 g/L、300 g/L)、HCA (V/V:3.3％、10.0％、30.0％)、DNCB (2.5 g/L、5.0 g/L、10.0g/L)、2-APC (12.5g/L、25.0g/L、50.0 g/L)、KOH (25 g/L、50 g/L、100 g/L)、SLS(50 g/L、100 g/L、200 g/L).于试验第1、2、3天将配制后不同浓度受试物稀释液以每耳25 μl/d均匀涂布于小鼠双侧耳后.检测小鼠耳缘厚度、耳引流淋巴结重量、B220+ (CD45R)亚群淋巴细胞百分数等指标.采用SPSS 11.5分析软件,对数据型指标进行方差分析,并对有差异的个体再行LSD两两比较,并根据刺激指数对受试物致敏性大小进行分级.结果 与溶剂对照比较中高剂量的SLS和KOH均可引起小鼠耳缘厚度增加(P＜0.01).可判定SLS、KOH对皮肤有刺激性.DNCB、HCA各剂量组和2-APC高剂量组刺激指数均大于3,可以判断该3种化学物为皮肤致敏物.根据SI计算EC3的值,对致敏物进行分类:DNCB (0.196)为强致敏物,HCA (1.556)和2-APC (3.156)为中等致敏物.结论 应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B220+ (CD45R)亚群淋巴细胞百分数作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验,结合耳缘厚度检测可实现同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性.
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双黄连注射剂中野黄芩苷致敏家兔后血清中特异性抗体的测定
目的 ELISA法检测双黄连注射剂中小分子半抗原成分野黄芩苷致敏家兔血清中的特异性抗体效价.方法 取新西兰兔,随机分为野黄芩苷组和对照组,采血,制备血清.分别将野黄芩苷与野黄芩苷组家兔血清体外孵育,与弗氏完全佐剂混合制成野黄芩苷-血浆蛋白完全抗原.多次免疫动物后获得针对双黄连注射剂中过敏性半抗原成分野黄芩苷的特异性抗体,ELISA法检测抗血清的抗体效价,间接竞争ELISA法测定血清的特异性,采用ELISA试剂盒检测抗血清中IgE抗体的含量.结果 对照组家兔抗血清中无额外的特应性抗体产生.野黄芩苷组抗血清中产生了高滴度的抗体,该抗体是由野黄芩苷致敏产生的,具有一定的特异性.野黄芩苷组家兔抗血清中产生了高滴度的IgE型抗体,比对照组高出了63.3%,提示野黄芩苷有潜在的致敏性.结论 野黄芩苷在此实验条件下对家兔能够产生特异性的高效价抗体,可能具有潜在的致敏性.
关键词： 双黄连注射剂 野黄芩苷 致敏性 免疫球蛋白E(IgE)
