重组人乳铁蛋白致敏性的初步研究

目的 初步评价牛乳腺生物反应器表达的重组人乳铁蛋白(rhLf)的致敏性.方法 通过生物信息学分析和消化稳定性试验了解rhLf致敏的可能性.结果 生物信息学分析显示rhLf与已知致敏原乳转铁蛋白和卵转铁蛋白有序列同源性,与Asp f2、Ole e 10和Ole e9存在结构相似性.消化稳定性试验显示rhLf在胃液中易被消化成小片段,在肠液中不易被消化.结论 rhLf具有一定的潜在致敏可能性.

含重组人乳铁蛋白乳粉蛋白质营养学评价

目的 评价牛乳腺生物反应器表达的重组人乳蛋白乳粉蛋白质的营养价值.方法 选用100只清洁级刚断乳(出生后20～23 d)SD大鼠(雌、雄各半),按性别、体质量随机分为5组:重组人乳蛋白乳粉组、普通乳粉组、酪蛋白乳粉组、牛乳铁蛋白乳粉组、重组人乳铁蛋白乳粉组,分别喂饲相应饲料28 d,观察大鼠的进食量、体质量,测定血常规、血生化情况,试验末期处死动物,称量脏器重量并对脏器进行病理学检查,计算蛋白功效比和校正蛋白功效比,对氨基酸评分.结果 重组人乳铁蛋白乳粉雄性动物组总体蛋白功效比值差异有统计学意义(P＜0.05),但重组人乳铁蛋白乳粉组雄性和其他对照组差异无统计学意义(P＞0.05).雌性动物重组人乳铁蛋白乳粉组和其他对照组蛋白功效比值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组人乳铁蛋白乳粉的蛋白功效和其他组相比并无较大区别,氨基酸评分结果显示苯丙氨酸和酪氨酸为第一限制氨基酸,与普通乳粉一样.

转人乳铁蛋白基因大米的慢性毒性研究

目的 观察转人乳铁蛋白(hLF)基因大米是否具有慢性毒性作用.方法 初断乳的180只SD大鼠按性别、体重随机分为3组:转基因hLF基因大米组、亲本大米对照组和AIN-93对照组,分别饲喂相应饲料12个月.观察大鼠的体重、进食量、血常规、血生化情况,实验末期处死动物,称量脏器重量并对脏器进行病理学检查.结果 转hLF基因大米组血常规(LYM％、GRN％)、血生化(ALT、AST、GLU)在个别时间点上与亲本对照组或AIN-93对照组存在显著差异(P＜0.05)；其他观察指标与两个对照组均无显著差异.结论 现有实验结果不能证实转hLF基因大米对大鼠有慢性毒性作用.

364产生高水平人乳铁蛋白的转基因人参细胞系

超声微弧氧化制备纯镁-硅烷-人乳铁蛋白复合膜层的细胞生物相容性研究

目的 制备纯镁超声微弧氧化(UMAO)-硅烷载不同浓度人乳铁蛋白(HLF)复合膜层,研究其对成骨细胞的影响.方法 以纯镁UMAO-硅烷为对照组,分别添加浓度为0.05 mg/ml、0.1 mg/ml、0.2 mg/ml的HLF为实验组,研究细胞黏附、增殖、形态情况.结果 Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定的光密度(OD)值,细胞黏附与增殖均为C组＞D组＞B组＞A组,各组随时间增长呈递增趋势,各组数据分析均具有统计学差异.激光共聚焦镜下示C组细胞数量与形态优.结论 纯镁UMAO-硅烷-0.1 mg/mlHLF复合膜层成骨细胞相容性佳.

人乳铁蛋白对卵巢上皮性癌细胞增殖及细胞免疫调节的作用

利用天然或合成的化合物对恶性肿瘤的发生、发展进行干预是近年来的研究热点[1].人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)是一种相对分子质量为76 000的糖蛋白,存在于多种体液或分泌物中,以人乳汁特别是初乳中含量高,具有抗肿瘤、抗细菌、抗病毒等多种生理功能[2].卵巢上皮性癌(卵巢癌)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,其病死率居妇科恶性肿瘤的首位,研究其防治方法意义重大.本课题组的前期研究显示,重组hLF( rhLF)可以抑制肿瘤细胞的增殖[3-4];本研究进一步观察了rhLF处理卵巢癌细胞后,其细胞增殖、细胞周期比例、细胞活性氧(ROS)表达以及细胞因子分泌情况,为探讨卵巢癌细胞增殖、转移等机制提供新的思路.

转入乳铁蛋白基因大米主要营养素的体内消化率及蛋白质营养价值评价

目的 对转人乳铁蛋白基因大米(hLF大米)与亲本大米(PR大米)主要营养素在体内的消化代谢及蛋白质的营养价值进行初步比较评价.方法 以6头近交系五指山小型去势公猪为实验动物,进行回肠末端造瘘手术安置T型瘘管,采用交叉法分别饲喂hLF大米、PR大米,收集回肠末端消化产物分析比较两种大米主要营养素的体内消化率,采用经消化率校正的氨基酸评分法( PD CAAS)对两种大米蛋白质的营养价值进行初步评价.结果 hLF大米与PR大米在蛋白质/氨基酸、碳水化合物、脂肪、纤维素的消化率上均无显著差异.人乳铁蛋白基因的插入使hLF大米中各氨基酸的含量配比得到了一定的优化,且其PDCAAS比亲本大米提高了2.66％.结论 hLF大米与PR大米在五指山小型猪体内主要营养素的消化代谢上满足“实质等同性”的要求,PDCAAS的结果显示hLF大米中蛋白质的质量略有提高.

273能产生高含量人乳铁蛋白的转基因人参细胞系

重组人乳铁蛋白小鼠喂养毒理学评价

目的 探讨牛乳腺生物反应器表达的人乳铁蛋白对小鼠亚急性毒性.方法 断乳昆明小鼠48只,雌雄各半,随机分为2组,对照组给予AIN-93啮齿类实验动物纯合饲料,人乳铁蛋白组饲料用重组人乳铁蛋白替代AIN-93中的酪蛋白制成,进行小鼠28 d喂养试验,每周记录体重和进食量,实验结束时分析血液、取脏器称重并进行病理组织学检查.结果 人乳铁蛋白组雄性小鼠终体重为(38.3±3.1)g,高于对照组的(34.9±4.3)g；人乳铁蛋白组雌性小鼠终体重为(31.2 ±2.4)g,对照组终体重为(31.2±1.9)g,2组差异无统计学意义；与对照组比较,人乳铁蛋白组小鼠食物利用率、血常规、血生化、脏器重量、脏体比和病理组织学检查结果未见明显改变.结论 牛乳腺生物反应器表达的重组人乳铁蛋白对小鼠未见亚急性毒性作用.

人乳铁蛋白对细胞增殖的影响

目的 探讨人乳铁蛋白(hLF)对体外培养细胞生长特性的影响.方法 MTT法评定hLF对人鼻咽癌细胞、中国仓鼠卵巢细胞、人肝脏细胞的生长抑制作用.结果 乳铁蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE的增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性,对正常细胞无抑制作用.结论 hLF可能是一种效果较好的新的抗肿瘤化学剂.

重组人乳铁蛋白基因克隆及表达

目的构建重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株,并对表达产物进行评价.方法由外周血白细胞总RNA经RT-PCR克隆获得HLF基因结构cDNA,测序后克隆人酵母表达载体获得质粒pPIC9K-HLF,线性化后电转化入毕赤酵母,经G418-YPD筛选多拷贝后进行甲醇诱导表达.结果获得基因与GenBank中的人HLF01基因基本相符.2株多拷贝菌株诱导表达产物均能与人HLF抗体反应,具有抑制大肠杆菌生长的作用.结论获得了能分泌有活性HLF的重组人乳铁蛋白(HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株.

乳铁蛋白与新生儿感染

乳铁蛋白(lactoferrin,LF)早在1939年被发现时,因带有红色而被命名为"红蛋白",20世纪60年代早期从牛乳和人乳中将其分离出来,1961年正式命名为乳铁蛋白,1984年确认LF的氨基酸序列,并分别于1987年和1997年明确人乳铁蛋白(hLF)和牛乳铁蛋白(bLF)的三维结构.

人乳铁蛋白基因的克隆及基因序列多态性分析

目的克隆人乳铁蛋白基因并进行基因序列分析.方法从人乳腺组织中提取出的总RNA进行逆转录,生成cDNA,以其为模板进行PCR扩增人乳铁蛋白cDNA.PCR产物纯化后连接到pGEM-T easy载体上并转化到DH5α菌中,然后对其进行DNA序列测定.结果本实验获得的基因序列与发表在GeneBank的hLF序列比较其同源性达99%,长度相符,为2149bp.与其他地区或国家相比较,有4～9个碱基有所不同.结论乳铁蛋白存在着基因序列多态性.

乳铁蛋白对辐射小鼠抗氧化作用的影响

目的 探讨人乳铁蛋白对电离辐射后小鼠生存率以及对抗氧化的影响,研究人乳铁蛋白防治辐射损伤的作用及其机制.方法 小鼠随机分成三组,即正常对照组、照射对照组和乳铁蛋白防护组.乳铁蛋白防护组的小鼠给予乳铁蛋白溶液3ml灌胃,(1.0 g/1 hLF,灌胃前30 min生理盐水配制,室温放置),正常对照组和照射对照组给与等量生理盐水灌胃,每组每天一次,连续7d或30 d,末次给药2h后照射对照组和乳铁蛋白防护组的小鼠接受一次性X射线2 Gy或6.8 Gy全身均匀照射.7 d/2 Gy研究比较人乳铁蛋白对血清SOD活性、MDA含量的影响,以及肝脏组织形态学的变化,30 d/6.8 Gy研究观察小鼠生存质量、生存率.结果 给予乳铁蛋白后可显著抑制受照射小鼠血清SOD活性的降低以及MDA含量的升高,同时也可减轻肝脏细胞的凋亡,并可提高小鼠辐射后30d的生存率.结论 人乳铁蛋白可提高受到辐射后小鼠机体的抗氧化能力,提高小鼠的生存率,提示其具有一定辐射防护作用.

HPLC-RID法测定及评价人乳铁蛋白转基因和非转基因山羊奶中乳糖的含量

目的 测定人乳铁蛋白转基因山羊奶及非转基因山羊奶中乳糖的含量,考察两者是否存在显著性差异,为人乳铁蛋白转基因山羊奶的实质等同性评价提供依据.方法 采用APS-2 HYPERSIL色谱柱,以乙腈-水(7∶3)为流动相,示差折光检测器,测定两种山羊泌乳30 d、60d及90 d采集的羊奶中各90个样本的乳糖含量,用SPSS软件对测定结果进行统计学处理.结果 泌乳30 d、60 d及90 d采集的样本中,转基因山羊奶的平均乳糖含量分别为43.2 mg/ml、37.4 mg/ml及40.2 mg/ml；非转基因山羊奶的平均乳糖含量分别为38.2 mg/ml、31.7 mg/ml及37.2 mg/ml.结论 在3个时间段采集的样本中,转基因与非转基因山羊奶中的乳糖含量均不存在显著性差异(P≥0.05).

人乳铁蛋白对小鼠辐射损伤保护作用

目的 研究人乳铁蛋白(HLF)对小鼠辐射损伤的保护作用.方法 无特定病原体级balb/c雄性小鼠随机分为正常对照组、照射对照组和HLF防护组.HLF防护组每天1次给小鼠灌胃质量浓度为1.0 g/L HLF溶液,连续7d.正常对照组和照射对照组用同样的方法灌胃给予等体积的生理氯化钠.后1次灌胃后2h除正常对照组外,其余2组小鼠全身均匀接受2.0 GyX射线照射,24 h后颈椎脱臼法处死小鼠.观察HLF对小鼠周围血白细胞(WBC)和脏器指数、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平、骨髓嗜多染红细胞微核的影响.结果 HLF防护组SOD活力、周围血WBC、脾脏和胸腺指数均升高,而MDA水平降低,与照射对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；HLF防护组的骨髓嗜多染红细胞微核率低于照射对照组(P＜0.05).结论 HLF对小鼠辐射损伤有一定的保护作用.

在体外用人乳铁蛋白抑制丙型肝炎病毒感染研究初探

我们利用Vero、 HepG2两种细胞系同时来验证人乳铁蛋白的抗HCV作用并初步确定蛋白的作用对象—细胞还是病毒，以此为该蛋白用于抗HCV临床治疗提供理论依据。一、材料与方法 1．细胞和血清：HepG2细胞系（Dr. Schinazi馈赠），Vero细胞系（由湖北医科大学病毒研究所保存）；细胞培养方法见文献[1]。阳性血清：７份HCV患者血清，混合后作为病毒接种物（测得HCV阳性混合血清的+RNA阳性，-RNA阴性；HCV RNA 拷贝数为5×104；HAV和HBV阴性）由湖北医科大学附属第一和第二医院传染科提供；阴性血清：2份（HCV和抗-HCV均为阴性）来自一健康体检者。

人乳铁蛋白对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的:探讨重组人乳铁蛋白(hLF)对体外培养的鼻咽癌细胞生长特性的影响.方法:MTT法评价hLF对人鼻咽癌细胞CNE、人肝脏细胞L02的生长抑制作用.结果:乳铁蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE的增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性,对正常细胞无抑制作用.结论:人乳铁蛋白可以抑制鼻咽癌细胞CNE的增殖.

重组人乳铁蛋白的遗传毒性研究

目的:评价重组人乳铁蛋白的遗传毒性.方法:以重组人乳铁蛋白为受试物,按每皿62、185、556、1667、5 000μg5个剂量进行Ames试验,按1.88、3.75和7.50g/kg行小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验和精子畸形试验,并设立对照组.结果:重组人乳铁蛋白各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系;各剂量组PCE百分比均未少于阴性对照组的20%,微核发生率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P.均>0.05);各剂量组小鼠精子畸形发生率均显著低于阴性对照组(P<0.05).结论:在本实验条件下,重组人乳铁蛋白未见遗传毒性.