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红曲霉降胆固醇有效成分的研究
红曲霉以其能产生大量天然红色素的特性而著称于世,此外还能产生多种有效的生理活性物质.日本学者对红曲降血脂、降血压等功能的发现 ,掀起了利用红曲开发保健食品的热潮.本文主要对红曲霉生产胆固醇合成途径中的限速酶抑制剂--Monacolin K类物质的研究、特性、药用价值和生产概况和进展等方面进行综述 .
关键词： 红曲霉 胆固醇合成抑制剂 Monacolin K -
微波法选育红曲霉菌种发酵生产生理活性物质的研究
目的 研究红曲霉菌种发酵生产生理活性物质Monacolin K的条件.方法 用微波法选育以红曲霉No.1为出发菌,经50W的微波辐照诱变获得Monacolin K高产菌株,并对其产色素和Monacolin K的发酵条件进行摸索和研究.结果 接种剂量3 ml、粳米与豆粕的配比=5: 1、培养温度28℃、培养时间9 d,产品色素含量高达348 μg/g、培养11 d Monacolin K达大值90 μg/g.结论 通过微波诱变红曲霉菌种,在适当的发酵条件下,可提高次生代谢物Monacolin K的产量,红曲色价变化不大.
关键词： 红曲霉 微波诱变 固态发酵 色素 Monacolin K -
粘质沙雷氏菌和红曲霉跨界原生质体融合子的分子鉴定
目的 应用分子生物学方法鉴定粘质沙雷氏菌和红曲霉原生质体跨界融合子.方法 采用随机扩增多态性分析和功能基因PCR扩增的方法对9个融合子进行分子鉴定.结果 筛选出的6条随机引物对2个亲本和9个融合子的DNA均能扩增出清晰的条带,除第5号融合子和粘质沙雷氏菌的相似指数略低,其余8个融合子和2个亲本的相似指数均大于2个亲本之间的相似指数.红曲霉和9个融合子中均能扩增出红曲霉功能基因mKH的条带,从粘质沙雷氏菌中则未扩增出相应条带.结论 用分子生物学方法证实获得的9个能产红色素的菌株均为粘质沙雷氏菌和红曲霉的跨界融合子.
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HPLC法测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量
目的 建立测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量的方法.方法 采用HPLC法,以甲醇作溶剂、摇床振荡(150 r/min)3 h提取洛伐他汀,色谱条件:以甲醇-18 mmol/L磷酸溶液(体积比为80∶20)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为237 nm.结果 洛伐他汀在5～50 μg/ mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好,加样平均回收率为100.75%,RSD为0.87%.结论 本方法简便有效,重复性好,可作为红曲霉相关产品的质量控制方法.
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洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH的克隆及其序列分析比较
目的 克隆红曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH,并进行序列分析和同源性比较.方法 根据GeneBank土曲霉和红曲霉洛伐他汀合成酶基因序列设计引物,以土曲霉和红曲霉基因组DNA为模板PCR扩增lovE和mkH基因并克隆到pMD19T simple载体.利用DNAMAN等软件以及互联网资源对lovE和mkH测序结果 与其编码的氨基酸序列进行分析比对.结果 分别扩增得到1512 bp和1464 bp的目的 片段lovE和mkH.结论 lovE和mkH同源性很高,并与GeneBank中相关已知序列基本相同,是洛伐他汀生物合成酶调控基因,且其表达产物为GAL4类转录因子.
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洛伐他汀产生菌的原生质体制备、灭活及融合条件研究
目的 探索构建洛伐他汀高产菌株的原生质体制备和融合方法.方法 考察了各种细胞裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉和土曲霉的原生质体制备、灭活及融合的影响.结果和结论 土曲霉和红曲霉在加石英砂混合酶体系中获得的原生质体数多,而适宜的渗透压稳定剂为0.6 mol/L的NaCl.红曲霉的原生质体在紫外灯(18 W)下15 cm照射50 min和土曲霉的原生质体在60 ℃水浴下保持40 min灭活率均达到100%.适合红曲霉和土曲霉的原生质体融合的条件为20% PEG在28 ℃下处理15～20 min.
