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枯草芽孢杆菌的基因组重排初步研究
目的:获得产高活性豆豉溶栓酶的枯草芽孢杆菌突变株.方法:用紫外诱变得到突变株,观察诱变效应,筛选透明圈直径与菌落直径比值大(HC值)的突变株,进行原生质体融合,筛选酶活高的菌株.结果:紫外诱变得到2株HC比值大的菌落;当溶菌酶为100 mg·L~(-1),处理时间为45 min进行原生质体融合时,效果好;当PEG为40%时,原生质体融合率大;后筛选出酶活可达2 013 U·mL~(-1)的突变株.结论:通过紫外诱变和原生质体融合,得到高活力的菌株.
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青春双歧杆菌原生质体与乳杆菌原生质体的融合
目的通过青春双歧杆菌原生质体与乳杆菌原生质体的融合构建耐氧双歧杆菌,以解决双歧杆菌制剂开发中始终存在的"活菌数低"和存活时间短等问题.方法将双歧杆菌、乳杆菌分别制成原生质体(Protoplast).在电脉冲(电融合法)条件下进行融合,近一步促进细胞核的融合,后达到基因重组.结果成功地构建出几株较为稳定的兼具双歧杆菌和保加利亚乳杆菌生物学特点的融合株.其中融合株B具有良好的耐氧性,并能在有氧、CO2条件下良好生长.结论通过原生质体融合技术改良双歧杆菌的严格厌氧特性,有利于对双歧杆菌的开发和应用.
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不对称灭活原生质体融合技术选育川丁特罗高效转化菌株
分别以紫外线和加热灭活方法处理短刺小克银汉霉(Cunninghamella blakesleana) AS 3.970原生质体,并将2种方法灭活的原生质体在聚乙二醇(PEG) 6000的作用下进行融合,从融合再生菌株中筛选川丁特罗高效转化菌株.结果显示,通过不对称灭活原生质体融合技术,获得1株川丁特罗高效转化菌株C.blakesleana AS 3.970 F-6,对川丁特罗的微生物转化率为(28.3±3.1)％,比原生质体融合前转化率[(8.2±2.6)％]提高了2.45倍.
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双歧杆菌和乳杆菌原生质体融合的研究
电场诱导双歧杆菌与乳杆菌的原生质体融合来构建耐氧双岐杆菌.本文采用Mutanolysin分别制备长双歧杆菌和保加利亚乳杆菌的原生质体,通过电场诱导长双歧杆菌原生质体与热灭活的保加利亚乳杆菌原生质体融合,在双层再生培养基上筛选融合株.结果成功地构建出几株较为稳定的融合株.提高了双歧杆菌的耐性,使其在有关制剂中存活时间延长.
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提高光合细菌应用效果的技术发展
光合细菌是一类能进行光合作用而不产氧的特殊生理类群原核生物的总称。光合细菌这一具有多种特定生理功能的水圈微生物，它不仅能利用光能，固氮合成有机物，也能通过多种方式和途径转化不同类型的有机物和无机物质，在水生态系统能量转换、物质循环和水体净化过程中起着十分重要的作用。光合细菌已在环保、生物工程、农牧和水产等领域得到广泛应用并取得显著成效。 虽然光合细菌有促进生长、防治病害、净化水质等多种生理功能，但由于光合细菌种类繁多，各有不同功能，因此如何提高光合细菌的应用效果，是人们目前特别关注的问题。本文就目前常用的各类提高光合细菌利用效果的生物技术手段作一简要综述。
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基因组重排构建柔红霉素高产菌株
目的 构建柔红霉素的高产菌株,提高柔红霉素发酵水平.方法 用基因组重排法构建菌株,用摇瓶发酵测定效价.结果 使柔红霉素发酵效价提高50%.结论 对于柔红霉素发酵效价的提高,基因组重排是一个可行的方法.
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鲍氏针层孔菌原生质体融合育种的研究
目的:鲍氏针层孔菌优良菌株的选育.方法:通过5.8S rDNA-ITS序列,生长速度、液体发酵生产菌丝体和胞外多糖产量等方面,对不同来源的菌株进行分析比较,筛选出优良的亲本菌株.在此基础上,采用双灭活标记,原生质体PEG诱导融合的方法.结果:筛选出亲本菌株SA02和SA04,以及编号为R002、R003、R005等三个融合菌株与两亲本菌株都具有拮抗反应,且菌落性状表现出不同于亲本的性状.结论:R002、R003和R005初步确定为双亲株的融合子.
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粘质沙雷氏菌和红曲霉跨界原生质体融合子的分子鉴定
目的 应用分子生物学方法鉴定粘质沙雷氏菌和红曲霉原生质体跨界融合子.方法 采用随机扩增多态性分析和功能基因PCR扩增的方法对9个融合子进行分子鉴定.结果 筛选出的6条随机引物对2个亲本和9个融合子的DNA均能扩增出清晰的条带,除第5号融合子和粘质沙雷氏菌的相似指数略低,其余8个融合子和2个亲本的相似指数均大于2个亲本之间的相似指数.红曲霉和9个融合子中均能扩增出红曲霉功能基因mKH的条带,从粘质沙雷氏菌中则未扩增出相应条带.结论 用分子生物学方法证实获得的9个能产红色素的菌株均为粘质沙雷氏菌和红曲霉的跨界融合子.
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青霉素产生菌的原生质体融合
将细菌血红蛋白基因引入青霉素产生菌产黄青霉H-106中而获得了产黄青霉基因工程菌1M5.产黄青霉20#是一个青霉素产量高但产孢子能力偏低的生产菌.为提高产黄青霉的产量及产孢子能力,降低产黄青霉对氧的需求,我们采用原生质体融合技术,将通过UV诱变处理后检出的产黄青霉基因工程菌1M5Met-缺陷型菌株和产黄青霉20# Arg-缺陷型菌株分别用Novozyme234和CellulaseR-10(1:1)混合酶处理所得原生质体按1:1混合后加入30%聚乙二醇6000融合,产物分离纯化,得到融合株C-396#菌株,其青霉素产量和产孢子能力都有所提高,对氧的需求有所降低.
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应用基因组重排技术提高泰乐菌素产量
目的 采用基因组重排技术选育泰乐菌素高产菌株.方法 通过经典诱变育种中获得的增产突变株中选取4株作为基因组重排的出发亲本,对它们进行了3轮基因组重排育种,筛选得到了高产重排菌株,其中1株重排菌株TLA16-336的泰乐菌素产量15.62g/L,比产量高的亲本菌株TLA15-52 l(12.53g/L)提高了24.7％,比原始出发菌株TL12-142(11.75g/L)提高了32.9％.结果 高产重排菌株在5L发酵罐上进行发酵试验,其泰乐菌素产量为16.03g/L,比原始出发菌株产量13.30g/L提高了20.5％.结论 对于泰乐菌素发酵效价的提高,基因组重排是一个可行的方法.
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原生质体诱变及融合选育那西肽高产菌株
目的 提高工业发酵那西肽生产水平,获得那西肽高产菌株.方法 利用溶菌酶剥离菌体细胞壁制备原生质体,通过等离子(ARTP)诱变与双亲灭活原生质体融合技术选育那西肽高产菌株.结果 通过对原生质体制备参数甘氨酸浓度,溶菌酶浓度以及酶解时间优化,确定了甘氨酸适浓度0.6％,溶菌酶适浓度50mg/mL,酶解时间70min.通过ARTP诱变筛选出突变株AH-12产量提高18％.亲本佳紫外灭活时间为4min,佳热灭活条件为65℃水浴50min.对融合子进行摇瓶选育,得到了GSM-4,GSM-5两株效价提高15％以上菌株.结论 利用原生质体诱变及融合方法可获得那西肽高产菌株.
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产黄青霉原生质体融合及融合子初步分析
目的 以青霉素工业生产菌株产黄青霉为研究对象,对丝状真菌原生质体融合及其融合子进行了初步的研究.方法 通过紫外线诱变和基因转化筛选出具有不同遗传标记的2株亲本菌株,对供体亲本菌株原生质体热灭活后进行原生质体融合,并对融合子进行了分离及传代分离.结果 在选择性培养基上筛选到5株融合子,融合率为2.97×10-5,融合子分离和传代分离后产生亲本菌株分离子和异核体.结论 5株融合子均为异核体,在自然条件下融合子很难形成杂合二倍体和重组子.
