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猴头菌麦角甾醇高产菌株选育及深层培养条件的优化
通过单因素实验确定猴头菌液态发酵培养的优碳源、氮源、无机盐；在此基础上，采用三因素三水平正交实验方法，确定液态深层发酵的培养条件；采用自然选育和紫外诱变法，筛选出麦角甾醇产量较高的猴头菌株。结论表明：葡萄糖2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.15%、硫酸镁0.075%、蛋白胨1%、起始pH值5.0、装液量80 mL、接种量6 mL，温度23℃、摇床转速150 r/min条件下，猴头菌生长情况良好；紫外线照射40 s的菌株在平板培养基上生长好，摇瓶发酵后发酵液、菌丝球、菌丝粉中麦角甾醇含量分别为：0.06225 mg/10 mL、9.6862 mg/g、18.4403 mg/g，明显高于对照组。
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紫外诱变选育北虫草新菌种的研究
针对野生菌种在人工培养基上容易丢失产生子实体的能力,稳定性差,且野生型菌种虫草菌素等生理活性物质含量较低等影响北虫草规模化人工栽培的问题,本文探索利用紫外线对出发菌株P进行诱变处理,以生物转化率、虫草素、腺苷含量为指标,筛选出高产菌株89,其有性子实体中虫草素含量和腺苷含量分别是出发菌株的2.5倍和3.6倍.进一步对其进行传代稳定性试验测试后,可用于大规模工厂化北虫草培育用菌种.
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枯草芽孢杆菌的基因组重排初步研究
目的:获得产高活性豆豉溶栓酶的枯草芽孢杆菌突变株.方法:用紫外诱变得到突变株,观察诱变效应,筛选透明圈直径与菌落直径比值大(HC值)的突变株,进行原生质体融合,筛选酶活高的菌株.结果:紫外诱变得到2株HC比值大的菌落;当溶菌酶为100 mg·L~(-1),处理时间为45 min进行原生质体融合时,效果好;当PEG为40%时,原生质体融合率大;后筛选出酶活可达2 013 U·mL~(-1)的突变株.结论:通过紫外诱变和原生质体融合,得到高活力的菌株.
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环氧氯丙烷拆分菌株的选育
目的 通过N+注入和紫外诱变选育拆分环氧氯丙烷的菌株.方法 从污泥中筛选得到一株拆分环氧氯丙烷的菌株并诱变选育.结果 该菌株生理生化鉴定为巨大芽孢杆菌,适生长盐度为20g·L-1.经过N+注入和紫外诱变,该菌株的目标产物含量达到99.2％,产率达到42％.结论 海洋巨大芽孢杆菌具有较好的工业应用潜力.
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紫外诱变法提高枯草芽孢杆菌抗菌物质产量
目的 枯草芽孢杆菌可以产生多种抗菌物质,具有极高的实际应用价值,本实验通过紫外诱变的方法以期提高其产生抗生素的效率,为以后能更好的利用该菌株提供基础.方法 先确定紫外诱变的佳条件(佳培养时间、对数期菌体浓度、佳紫外诱变时间),然后在佳条件下做三组平行紫外诱变实验,再经过初筛、复筛以期得到诱变高产菌种.结果 紫外诱变前菌体的佳培养时间为10 h,恰好到对数期,此时总活菌数为1.91×108个·mL-1,正好为诱变的佳菌浓,选择致死率在85％左右的60 s为佳诱变时间.经过初筛、复筛得到了期望的诱变高产菌种,其产率提高了大约3倍,并且诱变后的菌株具有传代稳定性的特点.结论 紫外诱变法可以显著提高枯草芽孢杆菌抗菌物质产量.
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紫外-亚硝基胍复合诱变筛选高产淀粉酶菌株
目的 经紫外-亚硝基胍(NTG)复合诱变选育高产淀粉酶菌株.方法 以蜡状芽孢杆菌SWWL06(Bacillus cereus SWWL06)为出发菌株,分别经紫外、亚硝基胍(NTG)诱变原始菌株,获得佳诱变条件；经紫外-NTG复合诱变,所得突变菌株以透明圈与菌落直径比值大小进行初筛,再经摇瓶培养进行复筛,得高产淀粉酶突变株；连续传代,检测其遗传稳定性.结果 确定紫外波长254 nm,照射时间120 s,垂直照射距离20 cm为佳紫外诱变条件；NTG浓度为0.5 mg/ml,诱变时间40 min为佳NTG诱变条件；紫外-NTG复合诱变筛选出9株突变株,其中UV-NTG-3酶活力为3.515 U/ml,增幅高,较原始菌株SWWL06提高3.59倍；将UV-NTG-3连续传代10次,酶活性仍可达到第一代的97％.结论 已成功选育出1株高产淀粉酶菌株UV-NTG-3.
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紫外诱变季也蒙毕赤酵母原生质体筛选木糖醇高产菌株
目的 通过对季也蒙毕赤酵母原生质体进行紫外诱变,筛选遗传性稳定的木糖醇高产菌株.方法 制备季也蒙毕赤酵母DQt1的原生质体,计算原生质体生成率及再生率,并对制备过程中的酶浓度(0.5％、1.0％、1.5％和2.0％)、酶解温度(26、28、30、32和34℃)及酶解时间(1、2、3、4和5h)进行优化.对采用佳酶解条件制备的原生质体进行紫外诱变,分别检测诱变30、60、90、120和150 s时原生质体的致死率,经重复筛选,采用高效液相色谱法测定菌株发酵液的木糖醇含量,并检测筛选出的木糖醇高产菌株的遗传稳定性.结果佳酶解条件为:酶浓度1.5％,酶解温度30℃,酶解时间3h,该条件下制备的原生质体经紫外诱变90 s(佳诱变时间)后,获得1株高产木糖醇诱变菌株YZ-57,其发酵液的木糖醇含量为9.78 g/L,比出发菌株DQll提高了186％,且具有良好的遗传稳定性.结论 季也蒙毕赤酵母原生质体经紫外诱变,成功获得一株季也蒙毕赤酵母木糖醇高产菌株YZ-57,且具有良好的遗传稳定性.
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产蛋白酶嗜热菌Anoxybacillus sp.紫外诱变研究
目的 对嗜热菌Anoxybacillus sp.进行紫外诱变,通过改变遗传性状获得产蛋白酶性能优良的嗜热菌株.方法 用牛奶平板对嗜热菌株产蛋白酶能力进行初步判断;将菌悬液置于紫外灯下照射不同时间,分别进行菌落计数、计算致死率;以紫外诱变后致死率75％ ～85％的诱变时间处理菌悬液,采用Folin法对紫外诱变前后的菌株所产蛋白酶的活性进行检测比较;诱变处理的菌液连续传5代,每代检测蛋白酶的活性.结果 嗜热菌Anoxybacillus sp.可在牛奶平板上产生清晰透明的蛋白水解圈;Anoxybacillus sp.DL4菌株经90s紫外照射处理后的致死率为81.46％;突变株的酶活性提高了17.33％;菌株传代5次,每代蛋白酶活性基本相同.结论 紫外诱变能够明显提高嗜热菌Anoxybacillus sp.DL4的蛋白酶活性,且其遗传稳定性较好.
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表柔红霉素工程菌的构建及其原生质体紫外诱变
本研究将质粒pYG836转化到柔红霉素产生菌SIPI-DM中,采用同源重组双交换法,用aveBIV基因置换基因组上的dnmV基因,得到稳定遗传的表柔红霉素工程菌DM3.为进一步提高工程菌的发酵单位,对其原生质体进行连续4次的紫外诱变育种,终得到一株发酵单位较出发菌株提高T93.7%的突变菌株.
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微生物转化左旋四氢巴马汀产生左旋紫堇达明高产菌株的紫外诱变选育
紫堇达明为中药元胡中高效、微量活性成分,灰色链霉菌(Streptomyces griseus ATCC 13273)具有转化左旋四氢巴马汀产生左旋紫堇达明的生物转化活性.本研究采用紫外诱变法对原始菌株进行诱变处理,以期获得左旋紫堇达明高产突变菌株.正交试验结果显示:孢子浓度为107个/mL,照射距离为30 cm,照射时间为30 s为佳诱变条件.筛选得到的突变株UV- 056对底物的转化率达到62.58％,左旋紫堇达明转化产率达到33.12％,分别较出发菌株提高了51.00％和67.63％.检测表明,突变株经连续传代后仍可保持较好的遗传稳定性.
关键词： 灰色链霉菌ATCC 13273 紫堇达明 紫外诱变 -
不对称还原制备(R)-3-羟基丁酸乙酯酵母菌株的选育
从5株酵母菌中优选出可用于乙酰乙酸乙酯(EAA)不对称还原为(R)-3-羟基丁酸乙酯的高转化活力菌株膜醭毕赤酵母-218,以其为出发菌株经紫外诱变处理,并结合底物抗性筛选,获得较佳菌株PC-126,该菌株相对酶活力和e.e.值(对映体过量值)分别比出发菌株提高39%和11%.由该突变株的底物耐受性研究表明,底物浓度可提高至0.35 mol/L.同时考察了PC-126菌株在5 L发酵罐中的产酶过程和转化时间曲线,结果表明,佳菌体培养时间为14～16 h,酶活力可达111.7 U/L,不对称还原反应转化时间为16 h,产率可达70.8%,e.e.值可达80.5%.
关键词： 紫外诱变 不对称还原 膜醭毕赤酵母 (R)-3-羟基丁酸乙酯 -
头状链霉菌原生质体的制备及其诱变
目的:建立头状链霉菌原生质体的制备方法,进而对其原生质体进行诱变,以期筛选到丝裂霉素C的高产菌株.方法:采用酶法制备原生质体,用紫外及激光进行原生质体诱变,HPLC检测突变株的生产能力.结果:头状链霉菌原生质体制备的佳条件为菌丝体培养基中含有1.5%甘氨酸、25%蔗糖,酶解液中含有溶菌酶5 mg/ml、蜗牛酶2 mg/ml、纤维素酶2 mg/m,溶菌温度33℃,酶解2 h.对其原生质体进行诱变,激光诱变正突变率高于紫外诱变,经激光诱变后得到两株高产突变株,分别比出发菌株产量高22.2%及23.0%.结论:该方法有效地改善了此株头状链霉菌原生质体制备效果,用其进行激光诱变筛选到了丝裂霉素C的高产菌株.
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产葡萄糖氧化酶黑曲霉紫外诱变及产酶条件的研究
目的 提高黑曲霉中葡萄糖氧化酶的产量.方法 紫外诱变法选出产酶优势菌株,优化碳源、氮源、碳酸钙、发酵时间等条件.结果 黑曲霉发酵液酶活达到6.5 U/mL,比初始酶活提高5倍；单因素条件试验表明,适碳源是蔗糖,适氮源是蛋白胨和NaNO3,发酵周期为48 h,培养温度是30℃,液体培养基的初始pH值为6.0产酶效果好.结论 紫外诱变后,葡萄糖氧化酶的活力有明显提高.
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红霉素链霉菌抗噬菌体菌株的选育
目的筛选红霉素链霉菌抗噬菌体菌株.方法以红霉素链霉菌B-27#为出发菌株,采用经过紫外诱变过的孢子悬浮液与噬菌体接触的方法进行处理.结果筛选到一株抗噬菌体高产菌株.通过噬菌体的侵染试验和摇瓶发酵生产能力验证,其抗噬菌体能力十分稳定,红霉素发酵摇瓶效价比对照有所提高.该菌株经纯化后投入生产,有效地控制和预防了噬菌体的污染.结论采用经过紫外诱变过的孢子悬浮液与噬菌体接触的方法进行处理,可以有效的获得抗噬菌体菌株.在试验中我们还发现,在紫外灯(253.7 nm、15 W、30 cm)下照射120 s,菌株出现抗噬菌体突变的几率高.
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链霉素与紫外诱变联合作用维生素B12菌种的研究
通过确定有效的链霉素剂量和紫外诱变时间,对产维生素B12的脱氮假单胞杆菌进行推理选育.首先从剂量上对脱单假单胞杆菌的作用进行确定,然后从紫外诱变效果上对脱单假单胞杆菌的作用进行优化,后通过链霉素与紫外诱变联合作用筛选出高产菌株2016-384,其效价较出发菌株提高16.0％.对菌株2016-384进行发酵工艺考察,其生产水平提高了11.8％.
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耐受高用量GPE型消泡剂土霉素菌株的选育
目的 土霉素的发酵过程中,消泡剂的添加会对龟裂链霉菌产生抑制作用,为此本论文研究选育耐受高用量GPE型消泡剂的土霉素菌株.方法 采用紫外诱变的方法,对菌株进行消泡剂耐受性筛选,再经摇瓶初筛、复筛,考察菌株的效价值及其传代稳定性.结果 筛选到的耐受GPE型消泡剂土霉素菌株在高消泡剂浓度(即10倍消泡剂浓度)下,仍然不影响菌株效价,而出发菌株在10倍消泡剂浓度下土霉素产量显著下降,下降了76.1％.且该耐受消泡剂土霉素菌株传代稳定性较好.结论 本实验所得耐受高用量GPE型消泡剂土霉素菌株与出发菌株比较,对消泡剂的耐受性有了很大提高.
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达托霉素生产菌(ATCC31568)的紫外诱变和抗生素抗性筛选
目的 建立一种提高达托霉素生产水平的方法.方法 以玫瑰孢链霉菌(ATCC31568)为出发菌株,利用紫外诱变结合抗生素抗性筛选以提升达托霉素生产水平.结果 通过对致死率和正突变率的考察,确定紫外诱变时间为45s,利福平和庆大霉素的合适筛选浓度分别为1.4μg/mL、1.0μg/mL,得到的突变株经摇瓶发酵后,采用高效液相色谱仪(HPLC)对终发酵液进行检测.筛选到的突变株Ge-27高产量达到79.44 mg/L,比原始菌株提高了42.2％.结论 采用紫外诱变结合抗生素抗性筛选得到了达托霉素合成水平提高的菌株.
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紫外诱变和氨基酸抗性筛选选育那西肽高产菌株
目的 筛选出那西肽高产菌株.方法 以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氧化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌.结果 通过致死率和正突变率的考察,确定紫外佳诱变剂量为100s.在分离培养基上层加入氯化锂和底层加入复合氨基酸进行正突变株的定向筛选,选育得到那西肽高产菌株UV-19-A12,其摇瓶效价达904.00μg/mL,比出发菌株提高72.5%,经过五代斜面传代试验考察,该菌株遗传性状稳定.结论 紫外诱变和氨基酸抗性筛选可以获得那西肽高产菌株.
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梧宁霉素C组分高产突变株的获得和产物初步鉴定
目的 选育抗真菌抗生素梧宁霉素高产菌株.方法 本文通过紫外线诱变的方式对不吸水链霉菌梧州亚种04(Streptomyces ahygroscopicus subsp.Wuzhouensis 04)进行菌种选育,并使用白念珠菌作为生物活性鉴定菌筛选高产突变株.结果 经筛选得到一株具有很高抑菌活性的突变株,在发酵液表观粘度、菌丝形态、组分分布等方面与出发菌株有明显差异.结论 经高效液相色谱及飞行时间质谱对产物的分析,证实该突变株为原出发菌株中含量较低的茴香霉素的高产菌株.
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产抗生素角毛壳菌CH21的诱变育种
以角毛壳菌(Chaetomium cupreum)CH21的萌发孢子作为诱变材料,采用微波辐照和紫外线照射进行诱变处理,用辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)作为测试菌株,结合PDA双层平板法初筛和管碟法复筛,选育高产抗生素的突变株.结果表明:佳微波诱变条件为500W、2450MHz、15s,紫外诱变条件为15W、30cm、300s.对出发菌株CH21进行一轮微波诱变和一轮紫外诱变,筛选得到5株高产菌株,其中CH21-2-20抑菌圈直径大,为20.20mm,较抑菌圈直径为12.50mm的出发菌株增大了62％.连续传代5次,CH21-2-20抑菌圈直径稳定在19.40～20.38mm.
