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对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨
目的 为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用.方法 用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用.结果 对氧磷(36.3nmol/L～36.3/μmol/L)与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响.对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性.对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高.加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用.结论 该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关.
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卡托普利对对氧磷所致血管内皮损伤的保护作用及机制探讨
目的 探讨卡托普利对对氧磷(paraoxon)所致血管内皮功能损伤的保护作用及其机制.方法 用大鼠离体血管环和培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验模型,以血管内皮依赖性舒张(EDR)反应、HUVEC的通透性、内皮细胞活力、内皮细胞的形态学改变及生化参数为指标,用对氧磷作为损伤因子,用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)卡托普利(captopril)作为保护药,观察了对氧磷对内皮的损伤作用及卡托普利的保护作用.用非巯基类ACEI(依那普利拉,enalaprilat)和抗氧化酶为对照,探讨了卡托普利对对氧磷所致血管内皮损伤的保护作用的机制.结果 对氧磷(3.63 μmol·L-1)与血管环或内皮细胞共孵30 min,显著性地抑制了血管EDR反应和增加了单层内皮细胞的通透性.卡托普利与血管环共孵30 min,剂量依赖性(0.1、1.0、10 μmol·L-1)地显减轻了对氧磷(3.63μmol·L-1)对血管EDR的抑制作用、保护了培养的HUVEC中NO的释放.对氧磷和卡托普利对硝昔钠(SNP)诱导的非内皮依赖性舒张反应没有影响.卡托普利(10 μmol·L-1)显著性地阻滞了对氧磷所致的单层HUVEC通透性的增加以及内皮细胞活力的降低、保护了超氧化物歧化酶(SOD)活性、阻滞了丙二醛(MDA)浓度的升高.超氧化物歧化酶、过氧化物酶(catalase)有与卡托普利相似的抗对氧磷损伤作用,但依那普利拉对对氧磷所致损伤无明显保护作用,巯基抑制荆(4-羟基汞苯甲酸普罗比妥钠,cystain)能显著性拮抗卡托普利的保护作用.结论 对氧磷能直接损伤血管内皮细胞,卡托普利对氧磷所致的血管内皮细胞损伤有显著性保护作用,其机制可能主要依赖于其所含的巯基的抗氧化作用,而非依赖于抑制血管紧张素转化酶.
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对氧磷介导氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞
探讨对氧磷诱导人脐静脉内皮细胞产生氧化应激损伤作用.首先建立对氧磷介导人脐静脉内皮细胞的氧化应激损伤模型,再用佳浓度对氧磷(1200μm)处理人脐静脉内皮细胞不同时间(0,6,12,24 h),用试剂盒分别测定各组细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)与乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Wstern blot法检测各组细胞中Notch1、Hes1、Bax、Caspase3和Bcl-2蛋白表达水平.结果显示对氧磷呈剂量与时间依赖性地降低细胞活力(P<0.05),降低SOD含量;升高MDA和LDH含量(P<0.05);对氧磷可上调Notch1、Hes1、Bax、Caspase3的表达(P<0.05),下调Bcl-2的表达,降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05).提示对氧磷可介导人脐静脉内皮细胞产生氧化应激损伤作用.
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对氧磷酶生物学特性及临床研究进展
对氧磷酶(PON)是一类催化水解磷酸酯键的芳香酯酶,它可降解有机磷酸酯、芳香羧酸酯及氨基甲酸酯等.对氧磷酶基因家族拥有PON1、PON2和PON3三个成员,它们有相似的结构及酶活性.近年来研究发现,PON与动脉粥样硬化及2型糖尿病发病机制密切相关.随着分子生物学的进展,对PON在疾病发病机制领域的研究更加深入,现就近年来的研究进展综述如下.
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血清对氧磷酶活性测定条件研究
目的 探讨不同底物浓度、Ca2+浓度、缓冲液浓度及pH情况下酶的活性,摸索酶活性测定的适条件.方法 通过改变底物、Ca2+、缓冲液浓度及pH值,在半自动生化分析仪上测定对氧磷酶活性,确定适反应条件.结果 酶促反应产物对硝基酚的吸收峰为405 nm,摩尔消光系数为17 143,酶促反应的适条件:0.4 mol/L甘氨酸、2mmol/L CaCl2、2mmol/L对氧磷、pH 10.结论 可以用此条件建立血清对氧磷酶的测定,但是试剂必须临用前配制.
