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细胞DNA中8-OH-dG的毛细管区带电泳检测方法的研究
目的以人肝肿瘤细胞HepG2为工具细胞,通过优化选择毛细管区带电泳的运行电压、温度、缓冲溶液pH值等条件,建立细胞DNA氧化损伤后8-OH-dG的毛细管区带电泳分离检测方法,并以此方法分别检测未经H2O2处理组与经15mmol/L H2O2处理组HepG2细胞DNA中8-OH-dG含量的变化.方法提取DNA采用饱和盐析法,避免经酚-氯仿抽提导致8-OH-dG的产生.DNA溶液中加入DNase Ⅰ、蛇毒磷酸二酯酶及碱性磷酸酶得到游离核苷,并经去蛋白,二乙醚抽提后用于HPCE分析.优化后的分析条件为:紫外检测器波长为254nm;pH值为9.5,浓度为20mmol/L硼酸钠水溶液;毛细管长度为47cm;运行电压为25kV;温度为25℃;进样方式为重力进样,进样时间为20秒.结果在上述实验条件下,细胞DNA处理得到的游离核苷电泳结果与5种核苷标准品的电泳结果符合.经或未经H2O2处理组HepG2细胞DNA中均检测出8-OH-dG峰,H2O2处理组细胞DNA中8-OH-dG含量增加.结论此方法操作简便易行,进样量小,需时间及费用少,灵敏度较高,对人体无损害,并为8-OH-dG在人群生物监测方面的应用奠定了实验基础.
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毛细管区带电泳法测定冬虫夏草及人工蛹虫草子实体中核苷及碱基成分的含量
目的:建市简单、快速测定冬虫夏草和人工蛹虫草子实体中虫草素、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶、次黄嘌呤、腺苷、鸟苷、尿苷、次黄苷9个核苷及碱基类成分的高效毛细管区带电泳法,比较天然冬虫夏草与人工蛹虫草子实体中核苷及碱基类化合物的含量.方法:采用未涂层熔硅弹性石英毛细管(75 μm法操作简便,实验消耗低,高效而快速,可以成为冬虫夏草及代用产品中核苷及碱基类成分榆测的一种简便、价廉、有效的分析方法.
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毛细管区带电泳分离/安培检测儿茶酚胺药物
目的:建立毛细管区带电泳(CZE)分离/安培检测左旋多巴(DP)、多巴胺(DA)、肾上腺素(EP)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)5种儿茶酚胺类神经递质(CAs)药物的方法.方法:采用石英毛细管柱(60 cm×50 μm),含8 mmol·L-1对-(季铵盐)杯[4]芳烃(QAC4A)的125 mmol·L-1磷酸氢二钠溶液(Na2HPO4,pH 7.0)为缓冲液,分离电压6 kV,分离CAs并利用Cu微粒修饰碳纤维电极检测.结果:优化条件下5种CAs被基线分离,回收率为92%～105%,5种CAs在0.2～1000μmol·L-1浓度内呈良好线性关系,低检测限为0.2 μmol·L-1.应用该方法成功地测定了5种CAs注射液、正常人和嗜铬细胞瘤患者尿样.结论:本法用于分离并检测CAs药物,具有准确、灵敏、简便的特点,适合该类药品分析.
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毛细管区带电泳法测定人工种植粗毛淫羊藿中绿原酸的含量
目的:建立粗毛淫羊藿中绿原酸含量的CZE测定方法,比较不同地区人工种植粗毛淫羊藿中绿原酸含量.方法:采用熔融石英毛细管柱(50μm×95 cm,有效长度86.8 cm)作为分离通道;以20 mmol·L-1硼砂(pH=9.12)为运行缓冲液;运行电压30 kV;毛细管柱温20℃;检测波长:327 nm;精密量取样品溶液,外标法测定含量.结果:粗毛淫羊藿中绿原酸成分得到完全分离,测定精密度得到明显改善;绿原酸的线性范围为3.28～42.64 μg·mL-1,r=0.9995;方法的加样回收率为98.6%,RSD为2.0%.结论:本方法简便、准确,重复性好.
关键词： 粗毛淫羊藿 绿原酸 毛细管区带电泳(CZE) -
重组人钙调磷酸酶B亚基的毛细管区带电泳分析方法
目的:建立毛细管区带电泳(CZE)分离分析重组人钙调磷酸酶B亚基的新方法.方法:用毛细管区带电泳分离模式,采用未涂层熔融石英毛细管50 μm×57 cm;电泳缓冲液:0.2 mol·L-12-吗啉代乙磺酸-0.05mol·L-1柠檬酸盐-乙腈(5:5:1,pH 2.5);分离电压:15 kV;柱温:25℃;压力进样5 s;检测波长:214 nm,进行纯度分析.结果:所建立的CZE分析方法能够将重组人钙调磷酸酶B亚基与未知杂质有效分离,主峰的迁移时间及峰面积的RSD分别为0.31%和1.5%.结论:所建立的毛细管区带电泳方法可以用于重组人钙调磷酸酶B亚基的纯度分析,它具有高效、快速、简便及样品和试剂消耗少等优点.
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毛细管电泳法快速测定大鼠血浆中丙吡胺游离药物和总药物浓度及血浆蛋白结合率
目的:建立一个全新、简单、快速的高效毛细管电泳方法,不需要对血浆样品进行任何前处理,血浆样品直接进样测定丙吡胺在大鼠血浆中的游离药物浓度和总药物浓度及血浆蛋白结合率.方法:采用40.2 cm未涂层石英毛细管(75 μm×375 μm,有效长度30 cm),分别以pH 7.4的20 mmol· L-1磷酸盐缓冲溶液和含有50 mmol· L-1三羟甲基氨基甲烷(Tris)的20 mmol· L-1磷酸盐缓冲溶液作为缓冲体系,测定游离药物浓度和总药物浓度.采用3.447 kPa压力直接进血浆样品5s,分离电压15 kV,温度20℃,检测波长190nm.结果:方法的专属性强,在线测定血浆中总药物浓度时,丙吡胺与蛋白的结合得到充分破坏并与血浆蛋白成分在5 min内达到基线分离,丙吡胺在血浆中总质量浓度分别在1.0～20.0 μg·mL-1和20.0～200.0 μg·mL-1的低、高浓度区间内呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.999 2和0.997 7,回收率为93.8％～110.7％.在体外血浆生物样品中,当预温孵的丙吡胺质量浓度为100、50、25、12.5、10 μg· mL-1时,血浆蛋白结合率平均值为86.7％、86.3％、86.4％、78.3％、74.7％.在体内血浆生物样品中,丙吡胺血浆蛋白结合率平均值范围在39.3％～91.5％.测定结果表明丙吡胺与大鼠血浆蛋白的结合具有一强、一弱2个结合位点,结合常数分别为5.3×104 mol-1.L和1.2×102 mol-1·L.绘制了大鼠在给药后24h体内丙吡胺游离和总药物浓度的药时曲线.结论:利用所建立的新方法,将含丙吡胺的血浆生物样品直接进样,高效、快速地测定了大鼠体内外血浆生物样品中丙吡胺的游离药物和总药物浓度.新建立的方法灵敏,高效快速,操作简单,耗样量少,价廉,有潜在的广泛的应用价值.
