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双创造酶切位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测MGMT基因多态性的应用
目的 建立简便易行、经济适用的MGMT基因4个单核苷酸多态性位点的检测方法.方法 应用碱基错配创造酶切住点原理设计引物,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-HFLP)技术判断MGMT基因四个SNP住点多态性.结果 设计一对引物PCR扩增含MGMT84多态位点的DNA片段,另一对引物PCR扩增舍MGMT基因143、160、178三个多态位点的DNA片段,使用4种限制性内切酶分别酶切判断4个位点多态性,PCR和酶切效果均较好.结论 应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MGMT四个多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点.
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应用创造酶切位点PCR-RFLP检测乙醇脱氢酶2基因多态性
目的 建立简便易行经济适用的乙醇脱氢酶2(ADH2)基因单核苷酸多态性检测方法.方法 根据单碱基突变位点的碱基替代情况设计引物,其中一条引物根据突变位点邻近序列设计,人为引入错配碱基,使引物3'端和单碱基突变的一种突变型在PCR扩增后形成一个酶切位点,并应用相应内切酶进行酶切鉴定,通过PCR-RFLP技术判断ADH2基因SNP位点多态性.结果 设计一对特异引物并PCR扩增舍ADH2多态位点的DNA片段,使用限制性内切酶Bsh1236I酶切判断ADH2位点多态性,PCR和酶切效果均较好.结论 应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的ADH2多态位点检测方法具备简便、经济、快速的特点.
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创造酶切位点PCR-RFLP检测MTHFR(rs2274976)基因多态性
目的 建立简便易用的 MTHFR 基因单核苷酸多态(rs2274976)的检测方法.方法 应用创造酶切位点原理设计引物,通过 PCR-RFLP 技术判断MTHFR基因SNP位点多态性.结果设计一对特异引物,其中正向引物3'末端与多态相邻,倒数第二位碱基为错配碱基C可在PCR扩增后与多态G等位基因及相邻片段形成CCGG结构,使用限制性内切酶MspI进行RFLP检测可判断MTHFR多态性.结论 应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MTHFR多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点.
关键词： 创造酶切位点 聚合酶链反应 限制性酶切片段多态性 单核苷酸多态性 MTHFR -
应用CRS-RFLP技术检测hOGG1c.326位点的单核苷酸多态性
目的探讨创造酶切位点的限制性片段长度多态检测技术(CRS-RFLP)检测单核苷酸多态性的方法及其应用.方法应用CRS-RFLP检测技术,检测hOGG1c.326位点的单核苷酸多态性,并与未引入错配位点时的限制性片段长度多态检测结果进行比较.结果 CRS-RFLP的检测结果与未引入错配位点时的限制性片段长度多态的检测结果一致.结论 CRS-RFLP检测技术适用于已知单核苷酸多态位点的检测,具有较好的应用前景.
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应用创造酶切位点PCR-RFLP检测POT1基因rs1034794位点多态性
目的 建立人端粒保护蛋白1 (protection of telomeres 1,POTl) rs1034794位点多态性的检测方法.方法 应用创造酶切位点法(created restriction site PCR,CRS-PCR)根据单碱基突变位点的碱基替代情况设计PCR引物.其中1条引物根据突变位点邻近序列设计,引入错配碱基,使得引物3'端和单碱基突变的一种突变型在PCR扩增后形成1个酶切位点,PCR产物用PCR-限制性片段长度多态性(PCR restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法进行分析.结果 设计1对特异引物,其中正向引物3'末端与多态相邻,倒数第三位碱基为错配碱基A可在PCR扩增后与多态T等位基因及相邻片段形成AGCT结构,使用限制性内切酶AluI酶切效果较好.结论 应用CRS-PCR方法创造的酶切位点可以有效而简捷地检测POT1 (rs1034794)基因多态性.
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广东人群药物代谢酶CYP2C9基因374G＞A位点多态性调查
目的 调查广东人群CYP2C9基因第3外显子374G＞A位点多态性.方法 应用创造酶切位点PCR扩增跨越374G＞A位点的DNA片断,用MluI酶切PCR产物,通过PAGE-银染判断基因型.结果 在受检的532例广东人中,未检出A374突变等位基因即CYP2C9*14等位基因,所有个体的基因型均为野生型纯合子G374/G374.结论 CYP2C9* 14等位基因为广东人群的稀有等位基因.
