首页 > 文献资料
-
双创造酶切位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测MGMT基因多态性的应用
目的 建立简便易行、经济适用的MGMT基因4个单核苷酸多态性位点的检测方法.方法 应用碱基错配创造酶切住点原理设计引物,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-HFLP)技术判断MGMT基因四个SNP住点多态性.结果 设计一对引物PCR扩增含MGMT84多态位点的DNA片段,另一对引物PCR扩增舍MGMT基因143、160、178三个多态位点的DNA片段,使用4种限制性内切酶分别酶切判断4个位点多态性,PCR和酶切效果均较好.结论 应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MGMT四个多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点.
-
应用创造酶切位点PCR-RFLP检测乙醇脱氢酶2基因多态性
目的 建立简便易行经济适用的乙醇脱氢酶2(ADH2)基因单核苷酸多态性检测方法.方法 根据单碱基突变位点的碱基替代情况设计引物,其中一条引物根据突变位点邻近序列设计,人为引入错配碱基,使引物3'端和单碱基突变的一种突变型在PCR扩增后形成一个酶切位点,并应用相应内切酶进行酶切鉴定,通过PCR-RFLP技术判断ADH2基因SNP位点多态性.结果 设计一对特异引物并PCR扩增舍ADH2多态位点的DNA片段,使用限制性内切酶Bsh1236I酶切判断ADH2位点多态性,PCR和酶切效果均较好.结论 应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的ADH2多态位点检测方法具备简便、经济、快速的特点.
-
中国4城市慢性乙型肝炎病毒感染者中B基因亚型分布
目的 了解北京、石家庄、温州和深圳4城市慢性乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)感染者中B基因亚型(Ba和Bj)的分布情况.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),对北京(18例)、石家庄(22例)、温州(34例)、深圳(27例)市101例乙肝患者血清标本,经多对型特异性引物巢式PCR鉴定为B基因型慢性HBV感染者的血清标本进行B基因亚型分析,并对部分血清标本以PCR产物直接测序法确定其亚型,以验证PCR-RFLP的准确性.结果 经PCR-RFLP分析101例均为Ba亚型,未发现Bj亚型,其中30例经测序分析也证实为Ba亚型.结论 4城市的HBV/B主要为Ba亚型.
关键词： 乙型肝炎病毒 基因型 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 -
福建省部分地区乙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义
目的首次调查福建省5个地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布状况,并探讨HBV基因型与HBV相关肝病临床的可能相关性.方法收集福州市、厦门市、泉州市、三明市、莆田市等地区慢性HBV感染者的血清,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测HBV基因型,应用多因素logistic回归分析、对应分析研究HBV基因型与临床的相关性.结果 431例HBV DNA阳性血清中基因B型275例(63.8%),C型100例(23.2%),D型及其混合型共51例(11.8%),未见A、E、F型.多因素logistic回归分析显示,泉州和三明地区HBV基因B型所占比例显著高于福州地区(P=0.002;P=0.006);无症状携带者、慢性肝炎、重型肝炎组都是以基因B型为主要基因型;基因C型在肝硬化中所占比例(47.0%)显著高于无症状携带者(14.5%)和重型肝炎组(14.7%)(P=0.009;P＜0.001);基因B型的e抗原阳性率(52.4%)显著低于C型(56.0%)(P=0.008);基因D型患者e抗原阳性率(30.8%)也低于C型(P=0.051).对应分析表明原发性肝癌(HCC)与基因D型及其混合型关系密切.结论 (1)福建省HBV感染以基因B型为主,其次是C型,也存在基因D型的流行.(2)福建省部分地区基因型B和C的分布可能存在差异.(3)基因B型在年轻患者中可能与重型肝炎的发展有关;基因C型在年长患者中可能更易导致肝硬化.(4)基因D型与HCC可能有一定的相关性,值得进一步研究.
-
中国汉族和维吾尔族艾滋病病毒感染者与未感染人群中CX3CR1基因多态性的分布
目的调查艾滋病病毒1(HIV-1)亚型辅助受体CX3CR1的V249I和T280M基因突变,在汉族和维吾尔族(维族)普通人群、HIV-1高危人群和感染者中的分布,探讨I249-M280单倍型与HIV-1感染和艾滋病(AIDS)病程的关系. 方法分别选择汉族和维族的普通人群、HIV-1高危人群和感染者,共6组,采取聚合酶链反应/巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,确定249和280密码子是否发生基因突变.采用行列表χ2检验及u检验进行统计学分析,分析同一民族不同人群之间是否存在差异. 结果维族人群I249和M280基因频率分别为16.1%和13.3%,汉族人群分别为3.3%和2.4%,其中感染者高于普通人群,普通人群高于高危人群,但三组之间差异无显著性.CX3CR1的I249和M280之间存在明显的连锁关系(P≈0.0).结论中国维族I249-T280单倍型频率(2.8%)明显低于高加索人(12.5%),I249-M280单倍型频率(13.3%)与高加索人接近(15.8%),汉族则两者都低得多(0.9%和2.4%).I249-M280单倍型与HIV-1易感性的关系应进一步研究.
-
胃溃疡患者人白细胞抗原-DQA1基因的检测
应用人白细胞抗原(HLA)基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性核苷酸分型技术,以等位基因特异性的限制性内切酶(Apal I、Bsaj I、Hph I、Fok I、Mbo、Mnl I)消化DQA1座位特异的PCR扩增产物,对50例胃溃疡患者、50例正常人的HLA-DQA1等位基因进行分析,旨在研究武汉地区汉族人HLA-DQA1基因与胃溃疡的相互关系.发现胃溃疡患者DQA1*0301显著增加(P<0.05),而DQA1*0102显著下降(P<0.05).提示DQA1*0301和DQA1*0102与胃溃疡有一定关联,胃溃疡患者与正常人之间存在着免疫遗传异质性的差异.
-
复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型
目的 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法.方法 根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型.结果 酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp).结论 PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型.
关键词： 尖音库蚊复组 抗性基因 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 分子分型 -
一种区分田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌的PCR-RFLP方法
目的 建立一种快速区分鉴别田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的分子分型方法.方法 设计特异引物对93株不同来源、不同生物型鼠疫菌的天冬氨酸酶基因(aspA)进行PCR扩增,用限制性内切酶Hpy CH4Ⅳ对扩增产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析;直接测序法检测aspA基因多态性.结果 aspA基因扩增产物经Hpy CH4Ⅳ酶切后呈现2种基因型:田鼠型鼠疫菌(38株)均为101、126 bp 2个条带;非田鼠型鼠疫菌(55株)均为227 bp单一条带.测序结果证实酶切识别位点发生突变导致带型差异.结论 初步建立了鼠疫菌PCR-RFLP(聚合酶链反应-限制性片段长度多态性)法aspA基因分型方案,通过Hpy CH4Ⅳ酶切带型差异区分高毒力的非田鼠型菌株与低毒力的田鼠型菌株,适用于疫源地流行病学调查.
关键词： 鼠疫耶尔森菌 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 分子分型 -
广西肝癌高、低发区CYP3A5基因多态性的对比
目的: 研究广西肝癌高发区和低发区人群中CYP3A5基因多态性, 以探讨CYP3A5基因多态性与肝癌易感性的关系.方法: 收集广西医科大学第一附属医院2005/12-2006/09经病理确诊的72例肝细胞癌(HCC)患者的肝癌组织及其癌旁组织, 患者分别来自于肝癌高发区(黄曲霉素高污染区)和低发区. 12例血管瘤的瘤旁肝组织作为正常对照. 用PCR-RFLP法检测CYP3A5在上述标本中的多态性.结果: 广西肝癌高发区患者C Y P 3A5 * 1等位基因频率和基因型比(C Y P 3A5 * 1 /*1+CYP3A5*1/*3)与广西肝癌低发区患者比较, 差异有统计学意义( P<0.05);肝癌高发区人群与正常对照组比较, 差异有统计学意义( P<0.05);低发区与正常对照组之间比较, 差异无统计学意义.结论: C Y P 3A5 可能参与黄曲霉毒素B1(AFB1)相关性HCC的发生.
-
TGF-α基因TaqⅠ RFLPs与国人非综合征性唇腭裂关系的研究
目的探讨国人非综合征性唇腭裂与转化生长因子-α(transformlng growth factor alpha,TGF-α)基因多态性的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性核苷酸分型技术,以TaqⅠ限制性内切酶消化PCR扩增产物,对107例非综合征性唇裂或唇腭裂(nonsyndromic cleftlip withor without cleft palate,NSCL/P)患者、136例正常人的TGF-a/Taq Ⅰ等位基因进行分析.结果NSCL/P患者的C2等位基因频率与正常对照组明显增高,差异有显著性意义(P＜0.05);有家族史的患者的TGF-α/Taq Ⅰ基因型与无家族史患者比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论TGF-α基因多态性与国人的非综合征性唇腭裂的发生有关;有先天性唇腭裂家族史可能与TGF-α/Taq Ⅰ少见变异体相互关联.
-
CYP1A1和CYP1A2基因多态性与汉族女性乳腺癌的关系
目的 探讨CYP1A1基因MspⅠ位点与CYP1A2基因C734A位点多态性与汉族女性乳腺癌的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术和限制性核酸内切酶酶切的方法,检测2011年9月至2012年8月在四川省医学科学院四川省人民医院确诊的144例女性乳腺癌患者(乳腺癌组)和152例同期健康体检正常女性(对照组)CYP1A1基因MspⅠ与CYP1A2基因C734A多态性位点的基因型,用χ2检验比较两组等位基因频率的差异.结果 在乳腺癌组与对照组中,CYP1A1基因MspⅠ位点T等位基因频率分别为0.73和0.65,两者差异有统计学意义(χ2=4.94,P=0.03),C等位基因与T等位基因相比,乳腺癌发病风险OR为0.67 (95%CI:0.47～0.96);CYP1A2基因C734A位点C等位基因频率分别为0.26和0.29,两者差异无统计学意义 (χ2=0.63,P=0.43).将乳腺癌组按照ER、PR表达与否进一步分组后,CYP1A1基因MspⅠ与CYP1A 2基因C734A 2个多态性位点的等位基因频率在ER(+)与ER(-)组之间以及PR(+)与PR(-)组之间差异均无统计学意义[ER(+)组比ER(-)组:χ2=0.34、0.01;PR(+)组比PR(-)组:χ2=0.60、0.68;P均>0.05].结论 汉族女性CYP1A1基因MspⅠ位点多态性与乳腺癌相关联.
-
亚甲基四氢叶酸还原酶基因 C677T多态性与脑梗死的关系
目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与脑梗死的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测72例脑梗死患者和69例对照者的MTHFR基因C677T多态性分布,并进行对比分析.结果 对照组MTHFR基因型CC、CT、TT频率分别为11.6%、44.9%和43.5%,脑梗死组分别为15.3%、50.0%和34.7%,两组各基因型分布间差别无显著性意义(P＞0.05);对照组等位基因C、T频率分别为34.0%、65.9%,脑梗死组分别为40.3%、59.7%,两组等位基因的分布间差别无显著性意义(P＞0.05).结论 本研究未发现MTHFR基因C677T多态性与脑梗死之间存在相关关系,应进一步行大样本的流行病学研究,以明确二者的相关性.
-
PCR-RLFP方法检测eNOS G894T多态性实验条件研究
目的：探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS) G894T多态性的佳实验条件。方法对PCR和RFLP的一些影响因素进行研究。结果 PCR扩增eNOS基因的佳条件为：20μmol/L的引物浓度；5.0 U的Taq酶量；112μmol/L的dNTP浓度。20μl体系中加4μl产物,5.0 U的酶消化4 h为经济有效的酶切体系。结论佳的实验条件的探索是进行大批量实验研究的关键。
-
TGF-β1基因多态性与糖尿病肾病患者易感性关系的探讨
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因多态性与糖尿病肾病(DN)患者的关系,并分析其基因型及血清水平与DN的相关性.方法:应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术对52例糖尿病肾病(DN)患者、58例糖尿病(DM)患者以及30例正常成人进行TGF-β1基因+869 T/C(Leu10Pro)多态性分析,并采用双抗体夹心EUSA法检测血浆总TGF-β1水平.结果:DN组基因型分布和等位基因频率与DM组和对照组相比,差异均有统计学意义(X12～42=6.38、4.68、7.05、4.76,P均＜0.05),DM组基因型分布和等位基因频率与对照组相比,差异无统计学意义(X52～62=0.88、0.18,P均＞0.05).基因型为TT型的入选病例血清总TGF-β1水平明显高于CC型和CT型(t2-3=8.37、6.89,P均＜0.01),CC型和CT型之间差异无统计学意义(t1=1.05,P＞0.05).结论:TGF-β1基因+869T/C(Leu10 Pro)突变可能与DN患者易感性有较密切的关系,且基因突变伴随血浆TGF-β1水平的升高.
-
抗原肽处理相关运载蛋白体基因多态性与1型糖尿病
目的 检测安徽省1型糖尿病患者的抗原肽相关运载蛋白体(transporter associated with antigen processing,TAP)基因位点多态性.方法 采用聚合酶反应-限制片断长度多态性技术,检测16名1型糖尿病患者和50名健康对照TAP位点的多态性.TAP1和TAP2基因分别有2和4个多态性位点,其限制性内切酶分别是TAP1等位基因333位点(TAP1-1,Ile-Val)的Sau3Al内切酶,637位点(TAP1-2,Asp-Gly)的AccI酶;TAP2等位基因379位点(TAP2-1,Val-Ile)的BstuI酶;665位点(TAP2-2,Ala-Thr)的MspI酶;565位点(TAP2-3,Thr-Ala)的RsaI酶以及687位点(TAP2-2,Stop-Gln)的BfaI酶.结果 病例组和对照组的TAP1等位基因型分别以637 Gly和637Asp为主;TAP2等位基因分别以379Ile和379Val为主,两组间差异均有统计学意义(P＜0.01).其余等位基因型差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 在1型糖尿病患者与正常对照人群间的某些TAP基因位点有差异,提示TAP基因可能与该病有密切关联.
-
利用孕妇血浆中胎儿DNA诊断胎儿ABO血型38例分析
目的 探索一种胎儿ABO血型的无创性产前诊断方法,为新生儿溶血病的预防提供可靠的依据.方法 武汉大学中南医院2005-03-07从38例18～38周可疑母儿血型不合的孕妇血浆中提取胎儿DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测胎儿ABO血型,分别扩增ABO糖基转移酶基因中2个特异性片段,然后分别用Alu1和Kpn1酶切消化,利用限制性片段长度多态性分析确定血型.结果 38例样本中,检测出32例胎儿的血型,新生儿出生后证实28例诊断正确:包括26例孕中期检出21例胎儿的血型, 18例正确;12例孕晚期检出11例胎儿的血型,10例准确.结论 利用孕妇血浆中胎儿DNA诊断胎儿ABO血型,是一种简便可行的无创性方法,值得推广应用.
-
亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与山东地区非综合征性唇腭裂相关性研究
目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与山东地区非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的相关性.方法 于2008年9月在山东省优生技术重点实验室采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,对2006年8月至2008年8月曾在齐鲁医院治疗的来自山东地区NSCL/P患儿家庭34户和健康查体的正常儿童家庭46户的家庭成员MTHFR基因的C677T基因型进行检测.结果 携带T等位基因的父母,其子代患NSCL/P的危险性是不携带T等位基因父母的子代的2.420倍;母子都是TT突变纯合子,子代患NSCL/P的危险性是母子为非TT纯合子的4.162倍;子代是TT突变纯合子患NSCL/P的危险性是非TT纯合子的3.812倍.结论 山东地区NSCL/P与MTHFR基因C677T的多态性相关,与父母的基因型存在联系;T基因在母子组合的研究中有统计学意义,父母传递给子代的T等位基因对后代的患病有重要作用.
-
VDR基因TaqⅠ位点单核苷酸多态性与宁夏回汉人群中重度慢性牙周炎易感性的相关性
目的 探讨维生素D受体基因( VDR) Taq Ⅰ位点单核苷酸多态性(SNP)与宁夏回汉人群中重度慢性牙周炎(CP)之间的相关性,并分析VDR基因的基因型和等位基因频率在回、汉人群中的分布是否有差异.方法 收集中重度CP患者178例(汉族90例、回族88例)和健康对照者187例(汉族95例、回族92例)的静脉血,采用PCR-RFLP方法测定Taq Ⅰ位点的基因型,应用病例对照研究分析VDR基因SNP与中重度CP的易感性是否有相关关系.结果 回族CP组和回族健康对照组在基因型的分布上有显著性差异,等位基因频率的分布上亦有显著性差异(P值分别为0.037,0.043)；汉族CP组和汉族健康对照组在基因型的分布上有显著性差异,等位基因频率的分布上亦有显著性差异(P值分别为0.033,0.039)；汉族CP组和回族CP组比较,两组在基因型和等位基因频率的分布上均无显著性差异(P值分别为0.785,0.788).结论 VDR基因TaqⅠ(rs731236)位点多态性与回族中重度CP和汉族中重度CP的易感性均可能存在一定的相关性.
-
Alzheimer病与载脂蛋白Eε4等位基因及血脂的关联
目的探讨Alzheimer病(AD)患者的载脂蛋白E(Apo E)基因的分布和血脂水平,分析它们的相关性.方法利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对AD患者和相应健康对照的Apo E基因进行分型,从而进行AD与Apo E等位基因多态性的关联分析,同时检测血脂水平.结果 AD病人Apo E等位基因4占20.74%,明显高于正常人对照组的7.64%;而3则占64.63%,低于正常人对照组的84.12%;AD患者血脂水平与于正常人对照组无显著差异.结论 Apo E等位基因中,4可能为AD的易患因子,而3则为保护因子,AD发病可能与血脂代谢无关.
-
亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态与2型糖尿病脑梗死的关系
目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)基因C677T多态与中国东北汉族2型糖尿病患者合并脑梗死的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测了对照组、2型糖尿病无大血管病变组和2型糖尿病脑梗死组共208名的MTHFR基因C677T多态性分布.结果经χ2检验,MTHFR基因各基因型频率在对照组、2型糖尿病组和2型糖尿病脑梗死组之间均无显著性差异(P>0.05);各等位基因频率在3组人群中均无显著性差异(P>0.05).结论未发现MTHFR基因C677T多态与2型糖尿病脑梗死之间存在相关关系.
