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犬黑皮质素受体3原核表达载体的构建与表达
背景:近年黑皮质素受体家族在体内能量平衡中的作用越来越受到重视.黑皮质素受体3基因突变是引起体质量增加的重要因素之一,但是目前对黑皮质素受体3的深入研究很少,且未见在蛋白水平上检测其表达的单克隆抗体.目的:构建犬黑皮质素受体3基因编码区的原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达.方法:以Beagle犬基因组DNA为模板,设计特异性引物,经PCR技术扩增目的片段后,克隆到pMD18-T载体上,双酶切鉴定以后将目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coli DH5α,筛选阳性克隆,DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,利用Western blot检测犬黑皮质素受体3融合蛋白的表达.结果及结论:成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R,经DNA测序证实插入序列与Genebank上公布的序列一致.此重组体经诱导后能在E. coli BL21内表达犬黑皮质素受体3融合蛋白,为进一步获取犬黑皮质素受体3的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究大黑皮质素受体3蛋白的结构和生理功能提供帮助.
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比格犬黑皮质素受体3基因A167T对体质量性状的影响
背景:MC3R基因突变是引起体质量增加的重要因素之一.目的:分析比格犬MC3R基因突变与体质量性状的关系.方法:抽取112只比格犬血液,记录体质量数据,然后提取DNA;采用AS-PCR技术对MC3R基因A167T侠点进行分析,并克隆测序.观察比格犬MC3R基因T167A的基因型分布及其与体质量的关系.结果与结论:167位点表现为A、T2个等位基因和AA、AT及TT 3种基因型;T167A碱基置换对犬体质量有显著影响(P<0.05).表明MC3R基因突变可致犬体质量增加,可作为犬体质量标记的候选基因.
