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全骨髓贴壁并差速传代分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞:与密度梯度离心法的比较
背景:目前国内外分离纯化骨髓间充质干细胞有两种主要方法;密度梯度离心法及全骨髓贴壁法,前者步骤较复杂,后者简单易操作,但纯化效果不理想.目的:在全骨髓贴壁分离骨髓间充质干细胞基础上,并用差速传代消化法,建立大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养纯化方法.方法:全骨髓贴壁培养法分离并差速消化传代大鼠骨髓间充质干细胞,利用间充质干细胞在消化传代过程中较其他骨髓细胞消化悬浮速度快,以及贴壁快的特点,代替密度梯度离心操作来分离纯化间充质干细胞,对其形态学特征进行观察,并与密度梯度离心法比较两种分离培养法的细胞生长增殖情况;观察碱性磷酸酶及油红染色情况,验证骨髓间充质干细胞的分化能力;检测细胞表面标记物,验证免疫特性及检测其纯度.结果与结论:全骨髓贴壁培养法分离并差速传代大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞鉴定、成骨成脂肪培养结果显示其细胞免疫特性、纯度、分化能力与密度梯度离心法无显著差异,但细胞活力,增殖能力有明显提高.
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大鼠根尖蕾细胞的分离培养
目的 研究大鼠切牙根尖蕾细胞的分离、培养和纯化的方法.方法 分离出生后3 d SD大鼠下颌切牙胚,切取根尖唇侧部分组织,酶消化法原代培养,利用差速传代纯化上皮细胞.用角蛋白14和波形丝蛋白染色确定细胞来源.结果 原代培养的细胞为上皮和间充质混合细胞,经2～3次差速传代后可获得纯化的根间蕾上皮细胞.免疫组化染色角蛋白14阳性,波形丝蛋白阴性.结论 利用酶消化法和差速传代法培养获得了纯化的根尖蕾细胞.
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大鼠Hertwig's上皮根鞘细胞的分离培养
目的:建立大鼠Hertwig's上皮根鞘细胞分离、培养和纯化的方法.方法:分离出生后7d SD大鼠上下颌第一、二磨牙牙胚,切取牙冠颈部组织,酶消化法原代培养,利用差速传代纯化上皮细胞.用角蛋白14和波形丝蛋白染色确定细胞来源.结果:原代培养细胞为上皮和间充质混合细胞,经2～3次差速传代后可获得纯化的上皮根鞘细胞.免疫组化染色角蛋白14阳性,波形丝蛋白阴性.结论:利用酶消化法及差速传代法培养并获得纯化的上皮根鞘细胞.
关键词： Hertwig's上皮根鞘 差速传代 SD大鼠 -
双向差速法纯化大鼠牙囊细胞
目的：利用牙囊细胞和成釉细胞贴壁速度及酶消化分离速度不同的特点，建立一种简便、快速纯化大鼠牙囊细胞的方法。方法取新生5~6 d SD大鼠下颌第一磨牙牙胚，在体视显微镜下剥离牙囊及成釉器，剪碎后酶消化并混合培养，再利用差速贴壁法和差速传代法纯化牙囊细胞。结果原代细胞为牙囊细胞和成釉器细胞混合生长，差速传代培养到第2~3代可获得纯化的牙囊细胞。倒置显微镜下观察牙囊细胞呈梭形或三角形，免疫组织化学染色显示抗波形丝蛋白阳性，抗角蛋白阴性。结论双向差速法是一种高效、简便的纯化牙囊细胞的方法。
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差速传代纯化大鼠牙囊细胞
目的:建立一种简捷的分离培养和纯化大鼠牙囊细胞的方法.方法:分离出生后6 d SD大鼠上下颌第一和第二磨牙完整牙胚,剥离牙囊和成釉器,剪碎后酶消化并混合培养,再利用多次差速传代纯化牙囊细胞.结果:原代细胞为牙囊细胞和成釉器细胞混合生长,差速传代培养到第4代可获得纯化的牙囊细胞.倒置显微镜下观察牙囊细胞呈长梭形或三角形,免疫组化染色抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性.结论:利用多次差速传代可从混合培养的原代细胞中获得纯化的牙囊细胞.
