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食管支架材料选择及在老年食管癌的应用
目的:分析组织工程人工食管不同代替材料的应用及相容性,讨其在老年食管癌置入后的疗效,求永久性的人工植入材料.方法:以gene chip,protein chip,artificial neural network,gastrointestinal cancer,diagnosis"为英文检索词,组织工程食管、人工食管,物相容性,管瘤,断"为中文检索词.由第一作者检索2000-01/2010-09PubMed数据及万方数据库,入与组织工程食管研究、人工食管置入后的生物相容性评价以及不同材料组织工程食管的实验分析相关的文献,除重复性研究.保留中英文30篇文献进一步归纳总结.结果:目前人工食管主要的并发症有吻合口瘘、狭窄、坏死、反流等.未来人工食管的研究方向主要集中在人工食管的构建理念以及构建材料的选择上,要有以下几种观点:①选择理想的材料并构建成合适的形状.②体外培养-移植体内-诱导食管再生.③研制一种可精确调控的可生物降解的生物型人工食管,接将其植人机体内,以此为支撑物,体内终诱导、再生出新生的食管.结论:组织工程食管的研究有朝着应用组织工程学方法构建与正常食管结构相类似的食管替代物,料的选择从单一的生物惰性材料向可降解吸收的生物活性材料转变的多元化研究发展的趋势.
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组织工程技术在食管缺损修复重建中的研究进展
目的 对组织工程技术在食管缺损修复重建方面的研究进展作一综述.方法 广泛查阅近年来组织工程技术在食管缺损修复重建方面的相关文献,对构建组织工程食管所需的支架材料、种子细胞及方法等进行综述.结果 大量基础研究和临床应用表明,组织工程食管能修复食管黏膜缺损及长段食管缺损,其修复效果接近自体组织结构及功能,但目前用于构建组织工程食管的支架材料及种子细胞众多,尚无统一制备技术,组织工程技术进入临床研究仍有一定差距.结论 组织工程技术为临床食管修复缺损重建提供了新的思路和依据,但用于临床有待进一步研究.
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显微剥离酶消化法体外培养人胚胎食管鳞状上皮细胞的方法研究
目的探讨利用显微剥离酶消化法行人胚胎食管鳞状上皮细胞原代培养的可行性,并对所得细胞进行纯化及传代培养.方法选择意外流产20周龄胎儿食管标本,通过显微剥离法获得菲薄食管黏膜上皮,经短时酶消化分离所得细胞,在10%胎牛血清混合培养基中培养,通过倒置显微镜、透射电镜及免疫组织化学方法鉴定所得细胞,并测定其生长曲线.结果倒置显微镜下见细胞呈不规则圆形或多边形,透射电镜可见其具有鳞状上皮细胞特征性的张力微丝,细胞表面微突起,细胞角蛋白免疫组织化学染色胞浆呈棕黄色阳性表现,MTT法测定第2代细胞在传代培养3～4 d达生长高峰.3、4 d吸光度(A)值与1、2、5及6 d比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论通过显微剥离酶消化法可获得足量、较纯食管鳞状上皮细胞,混合培养基中细胞能快速传代、扩增,适宜作为种子细胞构建组织工程食管.
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人工生物可降解支架构建组织工程食管的实验研究
目的 研究食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]三维支架材料上的黏附和生长情况,探索利用组织工程技术构建组织工程食管的可行性.方法 应用粒子浸出-常温模压法制作PLGA三维多孔支架材料;分离培养6只犬食管上皮细胞,体外扩增后,种植到预涂Ⅳ型胶原的PLGA支架材料上.在体外和犬腹腔内分别培养食管上皮细胞-支架复合物,分期终止培养,体外培养3 d,1、2、3和4周,其中将体外培养3 d后细胞-支架复合物植入同只犬腹腔内,于体内培养1、2、3和4周后行组织学、扫描电镜观察,以及细胞角蛋白抗体免疫组织化学检测.结果 分离培养的犬原代食管上皮细胞呈铺路石样,体外可大量扩增,细胞角蛋白抗体免疫组织化学染色呈阳性;体外及体内培养可见食管上皮细胞在支架材料上黏附、生长良好,持续培养仍保持食管上皮细胞特性;犬腹腔内培养4周后,可形成食管黏膜样组织.结论 预涂Ⅳ型胶原的PLGA支架材料适合食管上皮细胞黏附生长,可作为组织工程食管的支架材料.利用组织工程的方法在体外和犬腹腔内培养有可能获得适于移植的组织工程食管.
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小肠黏膜下层复合上皮细胞及成肌细胞构建组织工程食管的初步研究
目的 初步探索利用小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)作为支架材料,复合食管鳞状上皮细胞与成肌细胞构建组织工程食管的可行性. 方法 4周龄无胸腺小鼠20只,体重20.0±2.5 g,雌雄不限.体外分离、培养人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞,并行5-BrdU标记;制备SIS材料并切割成1 cm×1 cm大小,在SIS材料同一表面接种两种细胞,待细胞在材料表面贴附后将其植入裸鼠体内深筋膜下,于术后第3天及1、2、3周取材行组织学和抗角蛋白、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin, SMA)免疫组织化学观察,以了解食管鳞状上皮细胞、成肌细胞在SIS材料上的增殖、分化情况和复合物在裸鼠体内的血管化情况. 结果 人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞能够渗透、生长于SIS材料中,并形成数层结构.植入体内第3天可见细胞增殖为多层覆盖于材料表面,并分泌大量细胞间基质.第2周时已经形成7～8层细胞,并伴有血管长入.3周时细胞增殖为十几层,大量血管长入.通过5-BrdU标记抗体染色观察,示SIS支架材料上生长的细胞多为所植入细胞.抗角蛋白,SMA免疫组织化学染色示移植细胞能够在体内分化. 结论 成肌细胞与鳞状上皮细胞在SIS材料上的复合培养物,在体内能继续增殖分化形成多层细胞结构,并能快速血管化,可用于组织工程化食管的构建.
