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四种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响
目的:探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响,为类风湿性关节炎患者临床用药,改善其功能提供依据.方法:实验于2003-05/2004-02在的第一军医大学细胞生物实验室完成.类风湿性关节炎及正常滑膜组织,分别来源于第一军医大学南方医院脊柱骨病科和汕头市第二人民医院外二科因类风湿性关节炎而行全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的患者和无关节炎病史的创伤性截肢患者,用原酶消化法获得成纤维样滑膜细胞.用第2～4代细胞在接种12 h后分别加入上述药物处理24 h,在第5和第10天分别用四甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖情况并统计分析.结果:雷公藤、甲氨蝶呤第5天对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制率分别为(46.14±4.20)%和(31.52±2.86)%,第10天分别(47.00±1.89)%和(46.73±3.83)%.消炎痛及地塞米松对成纤维样滑膜细胞增殖无明显抑制作用.这种抑制作用对于类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖尤为明显.雷公藤多甙比甲氨蝶呤对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制作用有更明显的时间依赖性.结论:雷公藤、甲氨蝶呤对于类风湿性关节炎的成纤维样滑膜细胞增殖有明显抑制作用,适当延长甲氨蝶呤用药间隔时间对于抑制滑膜组织过度增生及血管翳的形成效果可能相似.
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单个结肠平滑肌细胞的制备
目的:探讨离体肠道平滑肌细胞分离方法.方法:采用混合酶法分离豚鼠结肠平滑肌细胞,通过台盼蓝染色法检查细胞成活率,并应用Ca2+荧光指示剂Fura 2-AM测定静息状态下结肠平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i).结果:成功地分离出单个结肠平滑肌细胞,其存活率为(96.7±2.6)%,在静息状态下且细胞外Ca2+浓度为1.5 mmol/L时,豚鼠结肠平滑肌细胞[Ca2+];为(108±9.4)nmol/L(n=6);细胞外Ca2+浓度为0时,[Ca2+]i为(72±11.8)nmol/L(n=6).结论:酶法分离的单个结肠平滑肌细胞活性好,可应用于肠道平滑肌细胞电生理、药理学研究.
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一种快速分离C2C12细胞核仁的方法研究
[目的]探讨一种快速分离核仁且能保持其完整结构与功能的方法.[方法]采用低渗裂解分离细胞核,密度梯度离心分离细胞核仁,电镜、免疫印迹检测核仁的纯度.[结果]电镜检测发现在放大2 000倍时C2C12肌源细胞核仁呈现为大小基本一致、形态较为规则的黑色阴影,放大25 000倍时可见单个网孔状的核仁,且核仁各组分清晰可见.免疫印迹检测发现核仁纯度较高,没有胞浆蛋白的污染.[结论]本研究建立了一种快速分离细胞核仁的方法.
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一种简易经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法
为探索一种简易而经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离、纯化的方法,笔者采用低浓度Ⅰ型胶原酶溶液作为细胞分离液,经胰胆管逆行注射,然后将剪碎的胰腺组织置于细胞分离液中消化;经过过滤、离心,提取胰腺腺泡细胞的单细胞悬液.结果示平均每只Wistar大鼠可获得4×106～5×106个细胞,纯度达70%～80%,与经典方法相比差异无显著性(P＞0.05).这种方法具有耗酶量少、技术难度小的特点,.可认为是一种简易、经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离、纯化方法.
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一种改进的简便经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法
目的:探索一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法,并探讨其对细胞功能的影响.方法:16只SD大鼠随机分成改进方法组和内灌注方法组,戊巴比妥腹腔麻醉后,其中8只按改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中,37℃,CO2孵箱中孵育30 min,过滤获得细胞悬液, Hanks液(不含钙离子)清洗后获得胰腺腺泡细胞,另外8只采用内灌注方法获取胰腺腺泡细胞,然后进行细胞计数、活力测定、纯化鉴定和细胞内钙离子测定.结果:改进方法所获得的胰腺腺泡数量[(5.0±0.7)×106]、纯度[(78±6)%]与内灌注方法所获得的胰腺腺泡数量[(4.7±0.9)×106]、纯度[(79±7)%]比较无统计学意义(P＞0.05),而细胞活力[(93±4)%]显著高于内灌注方法[(84±3)%](P＜0.05),细胞内钙离子浓度(3.62±0.54)显著低于内灌注方法(5.31±0.37)组(P＜0.05).结论:改进方法是一种稳定高效且对细胞活力及功能影响较小的胰腺腺泡细胞分离提纯方法.
