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3T3-L1脂肪细胞分化不同阶段抵抗素表达的变化
目的:抵抗素具有直接对抗胰岛素作用,观察3T3-L1脂肪细胞分化不同阶段过程中抵抗素mRNA和蛋白表达的变化.方法:实验于2006-03/10在郑州大学第一附属医院完成.3T3-L1前脂肪细胞由武汉同济医院儿科馈赠.①将3T3-L1前脂肪细胞接种于培养瓶,加入含体积分数为0.1小牛血清的高糖DMEM培养液,在37℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养.待细胞融合2 d后,加入体积分数为0.1小牛血清的高糖DMEM培养液培养(含0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、5 mg/L胰岛素、1 μmol/L地塞米松),诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟.②分别于诱导分化的第2,4,6,8天采集细胞,采用反转录-聚合酶链反应检测脂肪细胞抵抗素mRNA的表达,以免疫印迹分析方法检测脂肪细胞抵抗素蛋白的表达.结果:①3T3-L1前脂肪细胞分化的形态学变化:诱导分化前细胞呈梭形,胞浆中无脂滴,表现为成纤维细胞样的前脂肪细胞形态,待完全汇合后处于生长停滞期;诱导分化第2天细胞变圆;第4天时细胞变大,变圆,胞浆有少量脂滴出现;第6天脂滴明显增多;至第8天更多的脂滴积累,形成典型的"戒环"样结构.②抵抗素mRNA在3T3-L1脂肪细胞分化不同阶段表达的变化:3T3-L1脂肪细胞抵抗素mRNA在分化的第2,4,6,8天吸光度值分别为0.16±0.03,0.37±0.07,0.63±0.11和0.96±0.17,相邻两时间点比较抵抗素mRNA的表达差异均有显著性意义(P均＜0.01).③抵抗素蛋白在3T3-L1脂肪细胞分化不同阶段表达的变化:3T3-L1脂肪细胞抵抗素蛋白在分化的第2,4,6,8天吸光度值分别为28 942.5±1 392.7,59 326.7±2 954.3,107 821.6±4 325.1和173 656.5±8 356.7,相邻两时间点比较抵抗素蛋白的表达差异均有显著性意义(P均＜0.01).结论:抵抗素mRNA及蛋白在脂肪细胞分化成熟过程中表达逐渐升高.
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肥胖及2型糖尿病患者脂肪细胞脂肪酸结合蛋白水平及其临床意义
目的 探讨血浆脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(A-FABP)水平与肥胖类型,糖、脂代谢及胰岛素敏感性的关系.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测正常糖调节正常体重者(NW-NGR)44例,正常糖调节超重/肥胖者(OB-NGR)36例,新诊断2型糖尿病(T2DM)及其亚组2型糖尿病正常体重组( NW-T2DM )89例和2型糖尿病伴超重/肥胖组(OB-T2DM)44例空腹状态下血浆A-FABP,同时测定血脂谱、空腹胰岛素及测量体重指数( BMI)、腰围(WC)、腰臀比(WHR)和脂肪含量(Fat％)；采用HOMAIR评价胰岛素敏感性.结果 校正年龄、性别后,OB-NGR组,NW-T2DM组及OB-T2DM组血浆AFABP高于NW-NGR组[11.32(6.54-15.43)μg/L、14.60( 10.35 -20.10) μg/L、18.25(12.85 -26.65)μg/L vs 9.32(3.72 - 14.00)μg/L,P均＜0.05].OB-NGR组与NW-T2DM组间血浆A-FABP差异无统计学意义[11.32(6.54-15.43)vs 14.60(10.35-20.10)μg/L,P＞0.05],但OB-NGR组与NW-T2DM组均低于OB-T2DM组[11.32(6.54 - 15.43)μg/L、14.60( 10.35 -20.10 )μg/L vs 18.25( 12.85 -26.65)μg/L,P ＜0.01].校正年龄、性别及BMI后,血浆A-FABP与WC、WHR、FPG、TG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(r =0.416、0.341、0.344、0.196、0.306、0.312,P＜0.01).多元逐步回归分析示,HOMA-IR、性别、WC和年龄是血浆A-FABP主要的影响因素(P均＜0.05).结论 血浆A-FABP与腹型肥胖和胰岛素抵抗密切相关,可作为反映肥胖,特别是腹型肥胖的代谢标志物.
关键词： 肥胖症/代谢 糖尿病 2型/代谢 脂细胞/代谢 脂肪酸结合蛋白质类/代谢
