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同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应
背景：传统的细胞培养方法大多采用胎牛血清作为营养支持，其存在传播疾病的风险和免疫排斥反应。寻找胎牛血清替代物并建立规范、安全、高效的成人骨髓基质干细胞体外培养体系刚刚起步，有待进一步研究。目的：探讨AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养人骨髓基质干细胞的效果。方法：从成人骨髓穿刺液中分离人骨髓基质干细胞，分别用含体积分数10%AB 血清、自体血清和胎牛血清的基础培养基培养人骨髓基质干细胞，取第3代细胞进行相关指标检测。结果与结论：相差显微镜下见 AB 血清组细胞先达到汇合；流式细胞仪检测细胞表面抗原，各组均符合骨髓干细胞表型，纯化程度良好；Alamar Blue法显示AB血清组平均荧光强度高，促增殖效率高；Annexin V-FITC法显示各组细胞凋亡率均在5%以下，生长状态良好；碱性磷酸酶染色、钙结节和油红O染色结果显示，各组细胞均保持了成骨、成脂分化能力。AB血清对人骨髓基质干细胞的增殖作用较胎牛血清、自体血清明显增强。AB 血清有望替代胎牛血清建立符合骨组织工程临床应用要求的体外成人骨髓基质干细胞培养体系。
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不同血清对成人骨髓基质干细胞成骨诱导分化的影响
[目的]探讨三种不同来源血清对体外培养成人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向成骨诱导分化的作用.[方法]将体外第3代hBMSCs向成骨诱导分化培养,分为胎牛血清组(对照组)、AB 血清组和自体血清组.对比观察细胞碱性磷酸酶(ALP)染色、钙结节染色.诱导培养后4、7、14 d 和 21 d,各血清组分别进行钙黄绿素法荧光显微镜动态观察矿盐沉积,检测 ALP 活性,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)法检测成骨基因(ALP)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OCN)的表达.[结果]ALP 染色和钙结节染色结果显示,与自体血清(AS)组、胎牛血清(FBS)组相比,AB 血清(ABS)组明显提高了 hBMSCs 的染色阳性率.荧光显微镜下观察诱导 21 d 的 hBMSCs,ABS 组较 FBS 组、AS 组呈现更多的钙盐沉积.ALP 活性结果显示,同一时间点 ABS 组的 ALP 活性均明显高于 FBS 组和 AS 组,差异有统计意义(P<0.05).RT-qPCR 结果显示,在7、14 d 和 21 d,ABS 组 ALP、OPN 和 OCN 成骨基因表达均明显高于 FBS 组、AS 组,其中,ALP 基因表达在 7 d 出现峰值,OPN 基因表达在 14 d 出现峰值,OCN 基因表达在 21 d 出现峰值,差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]ABS 对 hBMSCs 成骨分化作用较 FBS、AS 明显增强.ABS 有望替代 FBS 建立符合骨组织工程临床应用要求的体外 hBMSCs 培养体系.
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AB血清对人体外终末期红系分化进程的影响
目的:探究体外诱导造血干细胞向红系分化过程中AB血清对终末期红系分化进程的影响.方法:从脐带血中用免疫磁珠法分离提取CD34+细胞,体外诱导其向红系分化.根据培养体系中是否添加AB血清,设置实验组为添加AB血清组,对照组为不添加AB血清组.通过检测细胞表面红系分化标志分子糖化血红蛋白A(glycophorin A,GPA)、人红细胞阴离子交换蛋白Band3及整合素α4(α4-integrin)的表达反映终末红系分化进程,用流式细胞术检测红系细胞终末分化脱核情况.结果:与对照组相比,实验组GPA阳性细胞百分率较高,Band3表达较高,而α4-integrin表达较低(P＜o.05).实验组细胞脱核百分率明显高于对照组(P＜0.05).结论:在体外红系发育培养体系中,AB血清对终末期红系分化进程有一定的促分化、促脱核作用.
