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超声微泡介导pEGFP-N1转染大鼠牙囊细胞:细胞生物学性质相对稳定
背景:利用超声波和微泡对比剂相互作用,产生空化效应和机械效应,破坏细胞膜的完整性,产生暂时性、可逆性的小孔,增加细胞膜的通透性,增强微泡载体对基因的转移,提高基因转染率。
目的:探讨在超声波辐照下微泡对比剂介导pEGFP-N1质粒转染SD大鼠乳鼠牙囊细胞的效率及安全性。
方法:体外原代培养新生SD大鼠牙囊细胞并传至第4代,在不同条件下采用pEGFP-N1质粒转染乳鼠牙囊细胞。以不同的超声辐照时间(15,30,45,60 s)和辐照强度(0.5,1 W/cm2)两两组合进行辐照,筛选较高转染效率的参数组合并应用于后续实验。实验分组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组和脂质体+质粒组。转染48 h后倒置荧光显微镜观察pEGFP表达,MTT法检测转染后的乳鼠牙囊细胞增殖抑制率。
结果与结论:超声强度为0.5 W/cm 2且辐照时间为30 s时转染率明显高于其他超声参数组合。该条件下超声微泡介导pEGFP-N1质粒对乳鼠牙囊细胞的转染率高于传统脂质体介导的转染率,且对细胞活力无明显影响。提示超声微泡能安全、高效介导pEGFP-N1质粒转染大鼠牙囊细胞,其细胞生物学性质相对稳定,可为牙周组织工程提供一种较理想的基因转染方法。