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组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞
背景：研究显示兔脂肪干细胞的体外分离方法大多数为Ⅰ型胶原酶消化法，采用组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞尚不多见。
目的：采用组织块贴壁法从兔脂肪组织中分离培养兔脂肪干细胞，并进行成脂、成骨的诱导分化。
方法：采用组织块贴壁法分离出兔脂肪干细胞，进行体外培养，观察其形态特征。取对数生长期的第3代细胞，用MTT法绘制其生长曲线；流式细胞仪检测其表面抗原CD29、CD44、CD45的表达情况；分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞和成骨细胞分化，油红O、茜素红染色定性鉴定。
结果与结论：体外培养的兔脂肪干细胞呈梭形纤维样细胞形态，生长力旺盛。流式细胞术分析结果显示，第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD29，CD44，阴性表达CD45。兔脂肪干细胞经成脂诱导14 d后，油红O染色阳性；成骨诱导培养14 d后，茜素红染色阳性。提示组织块贴壁法可以分离培养出兔脂肪干细胞。 -
冻存人脐带间充质干细胞的分离培养
背景:目前大多数报道是从新鲜脐带中分离培养脐带间充质干细胞,而从冻存脐带组织中分离培养间充质干细胞鲜有报道.目的:从冻存人脐带中分离培养间充质干细胞,并比较多种培养方法获得的脐带间充质干细胞的生物学特性.方法:采用组织块贴壁法从冻存脐带组织中分离培养脐带间充质干细胞,分别用有血清和无血清培养基培养,观察其形态特征,绘制其生长曲线;流式细胞仪检测第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)和第14代脐带间充质干细胞(含血清培养基培养)表面抗原表达;第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)分别用成脂、成骨、成软骨诱导培养液诱导其分化,qPCR鉴定分化标记基因表达;检测第7代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)及其培养上清中的细胞因子水平.结果与结论:①从冻存人脐带组织原代培养的脐带间充质干细胞,呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛,脐带间充质干细胞可用无血清培养基传代培养,但增殖速率还远低于有血清培养基;②流式细胞术分析结果显示为脐带间充质干细胞CD90、CD73、CD105呈强阳性表达,CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/CD19、HLA-DR呈阴性表达;③经成脂、成骨和成软骨诱导培养14-28 d后,脂肪细胞标记基因PPARγ、骨细胞标记基因 Osteonectin、软骨细胞标记基因 CollagenⅡ的表达量显著升高;④第 7 代脐带间充质干细胞及其培养上清可检测出粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、干扰素α2、趋化因子 IP-10、白细胞介素4、白细胞介素6等细胞因子;⑤结果提示可从冻存人脐带中培养扩增脐带间充质干细胞.
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不同代次人脐带间充质干细胞的生物学特性及分化
背景:人脐带间充质干细胞作为组织工程及再生医学领域的新兴种子细胞,其应用价值有赖于能否在长期体外传代扩增后仍保持稳定生物学特性和多向分化能力,需要进一步的实验研究.目的:研究不同培养代次人脐带间充质干细胞重要生物学属性的差异.方法:采用组织块法分离培养人脐带间充质干细胞,分别采用细胞计数法与MTT法检测第3-6代细胞增殖活性;流式细胞仪检测第1-9代细胞表面标志物;细胞染色法分析第3-6代细胞核型.取第3代人脐带间充质干细胞,检测其分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞的能力.结果与结论:①细胞计数法与MTT方法检测结果一致,第3-6代脐带间充质干细胞的增殖曲线均呈"S"型,在一二天时处于缓慢增长期,2-4 d时处于对数增长期,四五天时处于平台期,五六天时处于衰退期;②第1-9代脐带间充质干细胞表面高表达CD90、CD44、CD73,不或低表达CD11b、CD18、CD34、CD43及HLA-DR;③第3-6代脐带间充质干细胞核型均为正常人体核型;④脐带间充质干细胞可分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞;⑤结果表明,人脐带间充质干细胞具有高度增殖活性和多向分化特性.
