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丁香酚胚胎毒性评价:应用胚胎干细胞的实验模型
背景:丁香酚在医学及食品领域的应用越来越广泛,其药理学作用也不断被研究和发现.但是,对其毒性的研究尚未建立完整的数据库,特别是发育毒性及致畸性的安全性评价亟需完善.目的:建立胚胎干细胞实验模型的基础上,应用胚胎干细胞实验模型初步评价丁香酚的胚胎毒性.方法:体外培养小鼠成纤维细胞3T3和小鼠胚胎干细胞E14TG2a,MTT法检测阳性对照5-氟尿嘧啶、阴性对照青霉素G和受试物丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的细胞毒性,计算3种化合物对E14TG2a细胞和3T3细胞的半数生长抑制浓度值;采用悬滴-悬浮-贴壁法体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化,根据浓度-反应曲线计算3种化合物对E14TG2a细胞的半数分化抑制浓度值.利用胚胎毒性预测模型预测丁香酚的胚胎毒性.结果与结论:丁香酚对 3T3 细胞和 E14TG2a 细胞的增殖均有抑制作用,其半数生长抑制浓度值分别为(3.613±0.192)和(1.799±0.131) mg/L.丁香酚对E14TG2a细胞的心肌分化亦有抑制作用,其半数分化抑制浓度值为(3.501±0.158) mg/L.根据胚胎干细胞实验模型预测模型计算得出丁香酚为强胚胎毒性化合物.这为进一步评价丁香酚的安全性提供了研究数据.
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基于小鼠胚胎干细胞实验模型评价川芎水煎液的胚胎毒性
目的 建立小鼠胚胎干细胞实验模型,并以其评价川芎水煎液的胚胎毒性.方法 体外培养小鼠胚胎成纤维细胞3T3和胚胎干细胞(mESCs) D3,MTT法检测青霉素G、苯妥英钠、5-氟尿嘧啶对3T3、D3细胞的毒性作用,绘制细胞存活率-浓度曲线,计算3种受试物对2种细胞的半数抑制浓度(IC503T3和IC50 D3).利用悬滴-悬浮-贴壁方法,体外培养D3细胞分化成心肌细胞.通过实时定量PCR (Q-PCR)检测心肌细胞中肌球蛋白重链基因(β-MHC)的表达.再计算3种受试物对D3细胞的半数分化抑制浓度(ID50D3),判定其胚胎毒性等级.结果 青霉素G、苯妥英钠、5-氟尿嘧啶分别为无、弱、强胚胎毒性.川芎水煎液的IC50 3T3、IC50 D3、ID5o D3分别为9.39、18.78、10.20 mg/mL.结论 川芎水煎液胚胎毒性较弱.
