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CB1大麻素受体激动剂抑制基质金属蛋白酶参与脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性调节
目的：探讨CB1大麻素受体激动剂在大鼠脊髓损伤后对血-脊髓屏障通透性调节的作用。方法将150只雌性SD大鼠随机分为假手术组( Sham组)、脊髓损伤组( SCI组)和CB1激动剂处理组( ACEA组)。采用改良Allen法建立T9脊髓损伤实验动物模型。 Sham组仅行T9椎板切除术,SCI组和ACEA组以30 g·cm致伤力制作模型。 ACEA组建模成功后,每日腹腔给药ACEA 3mg/(kg·d)；Sham组和SCI组以生理盐水代替。建模术后12、24、72 h分时段处死动物,取T8~T10脊髓节段,Evans蓝含量测定法检测SCI后血-脊髓屏障通透性变化,定量RT-PCR法检测脊髓组织基质金属蛋白酶9(MMP9)表达水平。结果 Sham组脊髓通透性无改变,脊髓组织中无Evans蓝渗入,ACEA组Evans蓝通过血-脊髓屏障渗漏至脊髓,但渗漏量明显低于SCI组。 ACEA组MMP9表达水平显著低于Sci组。结论 CB1受体激动剂ACEA能降低Allen′s大鼠脊髓损伤模型血-脊髓屏障的破坏,其作用机制可能与MMP9的表达下调相关。
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粪肠球菌TLME3株AceA基因的克隆和序列分析
目的 了解粪肠球菌胶原黏附素A(AceA)基因及其编码蛋白的遗传变异情况,为筛选动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原基因奠定基础.方法 根据粪肠球菌B 343/TX2783株AceA基因序列设计引物,对粪肠球菌TLME3株总DNA进行PCR扩增,产物经胶回收试剂盒纯化回收,与pMD18- T连接,转化入E.coli DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆进行测序.使用Lasergene7.0、BLAST、MEGA 4.0等生物学软件,对克隆基因及其编码蛋白进行序列分析并生成系统进化发育树,计算基因核苷酸及编码氨基酸的变异率.结果 成功克隆了粪肠球菌TLME3株AceA基因,阅读框为918bp.与BLASTn和BLASTp搜索出的58个核苷酸和84个氨基酸同源序列的同源性均为96％～100％,氨基酸变异率为1.63％.结论 TLME3 AceA基因很保守,可以作为动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原候选基因.
