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GIF和Rab3a的表达纯化及其在AD病人脑提取液中的含量
目的验证AD病人脑中存在GIF和Rab3a蛋白.方法采用GST表达系统在E.coli中把构建好的质粒pGEX-4T-GIF、pGEX-4T-Rab3a,经转化、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化,得到GIF和Rab3a目的蛋白.利用已纯化好的目的蛋白做标准品,用直接型酶联免疫吸附测试(ELISA)方法初步测定AD病人脑提取物中GIF和Rab3a的蛋白含量.结果通过电泳表明,成功表达纯化得到了G蛋白Rab3a和GIF蛋白,利用Rab3a和GIF多克隆抗体用ELISA方法对AD症病人脑提取物中两蛋白的含量进行初步测定,结果表明在AD症病人的脑提取物中GIF的含量应为98.89ng/ml左右、Rab3a的含量为26.67ng/ml左右.结论在AD病人脑中存在GIF和Rab3a这两种物质.
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大鼠急性脊髓损伤早期Rab3a的表达
目的:对脊髓损伤大鼠组织中不同时间段的Rab3a表达情况进行观察,研究Rab3a在损伤的脊髓组织中对神经再生的影响.方法:SD大鼠58只,随机分成7组,6组制作成急性脊髓损伤模型,另一组作为对照组.分别于伤后0h、6h、12h、24h、48h、72h,采用免疫组化法检测损伤脊髓组织中Rab3a的表达.结果:免疫组化法显示Rab3a在脊髓损伤后6h表达下降到低,之后有所升高,1d表这高,后再次降低.结论；Rab3a在脊髓损伤后6h表达不明显.之后随着时间的延长表达逐渐增加,1d后再次降低,表明脊髓损伤后Rab3a表达随时间先降低而后升高,之后再次降低的变化,对脊髓损伤动物神经功能的恢复有重要作用.
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年龄对SAMP8小鼠不同脑区Rab3a含量的影响
目的 探讨年龄对小鼠不同脑区Rab3a含量的影响.方法 77只SAMP8小鼠分为4个年龄组:5、9、13、15月龄组.在进行行为学特征化后采用免疫印迹技术检测Rab3a蛋白和内参蛋白GAPDH在背海马、腹海马、额叶、顶叶和嗅球中的表达,Rab3a灰度值与GAPDH灰度值的比值作为Rab3a的相对含量.结果 在腹海马中,15月龄SAMP8小鼠Rab3a.的相对含量显著低于5、9、13月龄鼠(P值分别为0.014,＜0.001及0.001),而背海马、额叶、顶叶和嗅球Rab3a含量在各个年龄段间差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 在生命过程中,SAMP8小鼠脑内Rab3a含量相对恒定,仅高龄小鼠有区域特异性降低.
