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猪甲状腺过氧化物酶适pH与底物浓度的关系
目的研究部分纯化的pTPO的适pH及其对底物浓度的依赖性关系.方法用差速离心、胰酶增溶、盐析及三步柱层析法得到部分纯化的pTPO.在不同[H2O2]和[KI]条件下,采用碘氧化法测定pTPO适pH.在不同[H2O2]条件下,采用愈创木酚氧化法测定pTPO适pH.结果pTPO催化碘氧化的适pH对[I-]和[H2O2]有依赖性.当[I-]一定,随[H2O2]升高,适pH降低.当[H2O2]一定,随[I-]升高,适pH升高.而pTPO催化愈创木酚氧化的适pH与[H2O2]无关.结论TPO催化的碘和愈创木酚的氧化反应是经过不同电子传递途径进行的.
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日本刺沙蚕纤溶酶的酶学性质及其分类
目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的适反应温度和适反应pH 值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类.方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的适温度及适pH 值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+、Ca2+、Zn2+、Co2+、Fe2+、Fe3+、Al3+和Hg2+)确定金属离子对NJF酶活性的影响;采用9种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、EGTA、β-巯基乙醇、苯甲脒、碘乙酸、抑肽酶、胃酶抑素A和大豆胰蛋白酶抑制剂)确定NJF的蛋白酶分类.结果:NJF具有较宽的热稳定性及pH稳定性范围,在40～80℃及pH7～11范围内有较好的稳定性,NJF酶适温度为60℃,适pH值为9;Hg2+能够强烈地抑制NJF的酶活性,Cu2+具有较弱的抑制作用,而其他金属阳离子对酶活性无明显抑制作用;NJF的酶活性能被典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF完全抑制.结论:NJF是一种典型的丝氨酸蛋白酶.
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透明质酸修饰的尿酸酶多囊脂质体的体外特性及药效学过程
目的 研究透明质酸修饰的尿酸酶(UC)多囊脂质体(uricase in hyaluronic acid-uricase multivesicular liposomes,UHMVLs)的体外特性及其在大鼠体内的药效学.方法 采用复乳法制备UHMVLs并测定包封率及理化特性.取12只健康雄性SD大鼠,模型组采用次黄嘌呤和氧嗪酸钾建立高尿酸血症大鼠模型(n=3),UHMVLs组(n=3)和UC组(n=3)分别于建模后尾静脉注射UHMVLs和游离UC,并以正常组(n=3)为对照,测定大鼠血清中尿酸水平.结果 UHMVLs的平均包封率为(62.48±3.87)％ (n=3).UHMVLs和UC适温度均为40℃,适pH值分别为8.0和8.5.在同一温度(20～70℃)和pH(6.5～9.5)条件下,UHMVLs中UC的活性均高于游离UC(P＜0.05).除1、36、48 h外,其余各时间点UHMVLs降低高尿酸血症大鼠模型血清中尿酸水平的效果均较游离UC更显著(P＜0.05).结论 在相同条件下,UHMVLs不仅能提高UC的活性,还可以增强UC的稳定性;UHMVLs在大鼠体内降低血尿酸水平的能力优于游离UC.
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长白山白眉蝮蛇蛇毒PLA2分离纯化及性质鉴定
目的 从长白山自眉蝮蛇粗毒中分离提取了一种新的PLA2,并对其进行了性质鉴定.方法 采用DEAE Sephadex A-25、Sephadex G-75、HPLC等层析方法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳;磷脂酶A2活性测定.结果 得到了一种新的PLA2,分子量在14 kD左右,PLA2比活力为41μmol·mg-1·min-1,适温度50℃,适pH8.5左右.结论 长白山白眉蝮蛇毒存在一种新的PLA2同源物,具有PLA2活性,有较好的耐热、耐酸性.
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透明质酸修饰的尿酸酶多囊脂质体体外稳定性初步研究
目的:制备了透明质酸修饰的尿酸酶多囊脂质体(hyaluronic acid-uricase liposomes,UHMVL),并且对尿酸酶(uricase,UC)以及UHMVL在体外的活性和稳定性进行了初步的研究.方法:采用复乳法制备了UHMVL,并且测定了其包封率.然后从适温度(n=3)、适pH(n=3)、体外稳定性(n=3)初步考察了UHMVL和UC的差异.结果:UHMVL的包封率为(62.48±3.87)％.UHMVL及UC适温度均为40℃;UHMVL的适pH值为8.0,UC的适pH值为8.5.稳定性测定结果表明,UHMVL体外稳定性均比UC好.UHMVL在提高了UC在体外活性的同时,也明显地增强了UC在体外的稳定性.结论:UHMVL在提高了UC体外活性的同时,也明显地增强了游离酶UC在体外的稳定性.
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载天门冬酰胺酶自组装透明质酸-聚乙二醇/γ-环糊精纳米囊的体外活性和稳定性探究
目的:制备载天门冬酰胺酶(asparaginase,AN)自组装透明质酸-聚乙二醇(hyaluronic acid-graft-poly(ethylene glycol),HA-g-PEG)/γ-环糊精(γ-cyclodextrin,γ-CD)纳米囊(HA-g-PEG/γ-CD nanocapsules loaded with AN,AHRPs),并对AHRPs及游离AN在体外的活性及稳定性进行研究.方法:采用自组装法制备了AHRPs,考察了AHRPs的透射电镜、粒径、Zeta电位、适温度和适pH,并通过贮存稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、抗部分金属离子及有机化合物、热稳定性、酸碱稳定性和血浆稳定性等实验,对游离AN与AHRPs体外稳定性差异进行了一定的考察.结果:AHRPs的粒径为(410.30± 3.20) nm,Zeta电位为(-31.40±1.65) mV,AHRPs和游离AN的适温度分别为50 ℃和60℃,适pH值均为7.5.稳定性实验结果显示,相同条件下,AHRPs的贮存稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、抗金属离子和有机化合物、热稳定性、酸碱稳定性和血浆稳定性均优于游离AN.结论:AHRPs能同时提高游离AN在体外的活性及稳定性.
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脂质纳米粒提高尿酸氧化酶体外稳定性的初步研究
目的:使用Tricine-NaOH缓冲液制备含UOX的脂质纳米粒(urate oxidase lipid nanoparticles prepared by Tricine-NaOHbuffer,UTLNs),并对游离尿酸氧化酶(urate oxidase,UDX)在体外的活性和稳定性进行初步研究.方法:采用逆向蒸发法制备UTLNs.分别从适温度、适pH、热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性和抗胰蛋白酶水解能力初步考察游离UOX和UTLNs的差异.结果:游离UOX和UTLNs适温度均为40℃;游离UOX适pH为8.5,UTLNs适pH为8.0;稳定性结果显示,UTLNs的体外稳定性明显优于游离UOX.结论:UTLNs不仅提高了UOX在体外的活性,并且明显地增强了UOX在体外的稳定性.
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聚乙二醇化尿酸酶脂质体的稳定性研究
目的 制备聚乙二醇化尿酸酶脂质体(PULPs)并考察其活性与稳定性.方法 采用逆向蒸发法制备PULPs,并考察其适温度、适pH、热稳定性、贮存稳定性及其抗胰蛋白酶水解的能力、抗部分金属离子及有机化合物影响的能力.结果 PULPs的适温度为40℃,适pH为8.5;PULPs的热稳定性、贮存稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、抗部分金属离子及有机化合物影响的能力均优于尿酸酶.结论 PULPs在增强聚乙二醇化尿酸酶活性的同时增强了稳定性.
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天门冬酰胺酶聚乙二醇-透明质酸/磺丁基-β-环糊精纳米粒体外稳定性的初步研究
目的 制备含载天门冬酰胺酶(Asp)的自组装聚乙二醇-透明质酸/磺丁基-β-环糊精纳米粒(THSCD),并初步研究两者在体外的活性以及稳定性.方法 采用自组装法制备THSCD;分别从适温度、适pH、酸碱稳定性、热稳定性、贮存稳定性、血浆稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、部分金属离子及有机化合物影响来考察THSCD中Asp和游离Asp的差异.结果 THSCD的适温度为50℃,游离Asp适温度为60℃.THSCD的适pH为6.5,游离Asp的适pH为7.5.THSCD的热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性、血浆稳定性测定、抗胰蛋白酶水解能力和抗部分金属离子和有机化合物能力均比游离Asp好.结论 THSCD在提高了Asp在体外活性的同时,也明显地增强了游离Asp在体外的稳定性.
