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NZW小鼠中CD4+T细胞活化后IL-10R1表达的研究
目的:检测系统性红斑狼疮小鼠(NZW小鼠)CD4+T细胞在活化后表面IL-10R1的表达变化,为进一步研究白细胞介素10 (Interleukin 10,IL-10)相关免疫疾病的发病机制及进展提供有力支持.方法:取小鼠的脾细胞,经溶血后采用尼龙毛法去除B淋巴细胞,细胞经抗-CD3和抗-CD28多克隆抗体刺激,分别在活化后0,18,24和48h采用流式细胞术以FITC抗-CD4抗体标记CD4+T淋巴细胞检测il-10r1的表达情况.结果:未活化时NZW小鼠CD4+T淋巴细胞不表达白细胞介素10受体1 (interleukin receper 1,IL-10R1),在活化过程中IL-10R1开始表达,表达水平无明显波动,且表达水平远低于C57BL/6小鼠高峰时.而C57BL/6小鼠未活化时不表达IL-10R1,在活化过程中,随时间延长IL-10R1表达增加,24h达到高峰,随后下降,48h情况与0h基本相同.结论:NZW小鼠体内淋巴细胞表面IL-10R1表达水平下降,IL-10对其包括调控功能在内的作用下降.并且NZW小鼠IL-10R1表达时间延长,由于IL-10R1基因免疫调控区的突变,导致IL-10对CD4+T淋巴细胞调节功能失调.这些都与系统性红斑狼疮发病及进展有关.
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抗原刺激后小鼠CD4+T细胞IL-10受体Ⅰ表达情况的研究
目的:检测抗原刺激后小鼠CD4+T淋巴细胞表面白细胞介素10受体I(interleutin-10 receptor I,IL-10R1)表达变化情况.方法:取C57BL/6小鼠脾细胞,溶血后采用尼龙毛去除B淋巴细胞后,流式细胞仪无菌分选CD4+T淋巴细胞,利用anti-CD3和anti-CD28多克隆抗体刺激分选后细胞,分别在第0、12、24、48和72 h应用流式细胞术检测IL-10RI表达情况.结果:0h时小鼠CD4+T淋巴细胞不表达IL-10R1,随着刺激时间的延长IL-10R1表达增加,24h时达到高,随后表达水平开始下降,72 h时表达情况与0h基本相同.结论:白细胞介素10( interleutin-10,IL-10)对小鼠CD4+T淋巴细胞的调节可能是在IL-10R1短暂表达的72 h内.
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白细胞介素10及受体在系统性红斑狼疮患者中表达的研究
目的 明确白细胞介素10(IL-10)及IL-10受体(IL-10R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病过程中的作用.方法 应用流式细胞微球捕获技术检测血浆IL-10表达水平,应用流式细胞方法检测外周血白细胞表面IL-10R表达水平.共检测40例SLE患者和20例正常对照者.以SLE疾病活动性指数(SLEDAI)判定SLE疾病活动性.结果 狼疮肾炎(LN)患者血浆IL-10表达水平较正常对照者高.各细胞亚群表面的IL-10R表达水平在SLE和正常对照组中相似,但是,LN患者的CD4+和CD8+T细胞表面IL-10R表达降低.血浆IL-10水平与SLEDAI没有相关性,而CD4+T细胞和CD8+T细胞的IL-10R1表达水平与SLEDAI呈明显负相关.结论 IL-10及其受体在狼疮肾炎发病过程中可能具有重要的作用.
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小鼠CD4+T细胞活化后IL-10受体I表达的研究
目的:检测抗小鼠CD4+T淋巴细胞活化后表面白细胞介素10受体I(IL-10R1)表达变化,为进一步研究白细胞介素10(IL-10)相关免疫疾病的发病机制及进展提供有力支持.方法:取C57BL/6小鼠脾细胞,溶血后采用尼龙毛去除B淋巴细胞后,流式细胞仪无菌分选CD4+T淋巴细胞,利用anti-CD3和anti-CD28多克隆抗体刺激分选后细胞,分别在第0、12、24、48和72小时流式细胞术检测IL-10R1表达情况.结果:0小时时小鼠CD4+T淋巴细胞不表达IL-10R1,随着刺激时间的延长IL-10R1表达增加,24小时时达到高,随后表达水平开始下降,72小时时表达情况与0小时基本相同.结论:CD4+T淋巴细胞活化后IL-10R1表达短暂,以24小时时表达高.
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IL-10RA基因多态性及其与系统性红斑狼疮关系的研究
目的:确定SLE模型小鼠IL-10RA基因变异及其与SLE表现型是否存在关联.方法:用微卫星遗传标记及数量性状位点(QTL)分析方法确定SLE模型小鼠B/W F1的SLE易感基因精确染色体定位并选取候选易感基因,对候选易感基因进行测序分析,选取有基因序列异常的候选易感基因进行PCR-SSCP分析,确定候选易感基因碱基序列变异位点与抗染色质抗体、抗DNA抗体,抗组蛋白抗体及蛋白尿等SLE表现型的相关关系.结果:QTL分析结果表明B/W F1×NZB小鼠抗染色质抗体易感基因与NZW型IL-10RA基因紧密连锁;测序分析发现IL-10RA基因编码区有18处碱基变异,其中7处碱基变异将导致编码氨基酸的变异;抗染色质抗体、抗DNA抗体,抗组蛋白抗体及蛋白尿等SLE表现型与NZW型IL-10RA基因密切相关.另一种SLE模型小鼠MRL的IL-10RA基因存在相同变异.结论:NZW小鼠IL-10RA基因编码区碱基序列存在变异,B/W F1×NZB小鼠SSLE表现型与NZW小鼠第9染色体IL-10RA编码区碱基变异相关,提示IL-10RA可能是SLE模型小鼠的一个SLE易感基因.
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IL-10RA基因多态性与儿童幽门螺旋杆菌感染关系的初步探讨
目的 探讨白细胞介素10受体(IL-10R)基因多态性与儿童幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的相关性.方法 262例因消化道症状而行13C呼气试验(13C-urea breath test,13C-UBT)患儿,依据Hp检测结果分为Hp感染组和对照组,并留取患儿唾液标本,提取样本DNA,应用PCR及Sanger基因测序方法筛查IL-10R的多态性基因及分布情况.结果 本实验共筛查IL-10RA的5个基因多态性位点rs4252249、rs2228054、rs2256111、rs2228055及rs2229113.第四外显子的基因多态性位点rs2256111、rs2228054的AA、AG、GG三种基因型,经统计学分析,GG基因型在组间差异具有统计学意义(P＜0.05);等位基因G在感染组和对照组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 提示IL-10RA第四外显子的基因多态性位点rs2256111、rs2228054的GG基因型及等位基因G可能与Hp感染相关.
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三十例极早发型炎症性肠病患儿的临床表型和基因特点分析
目的 探讨中国极早发型炎症性肠病(VEO-IBD)患儿的遗传学及临床特点.方法 分析确诊的30例VEO-IBD中国汉族儿童的发病年龄、临床表现、体格发育、实验室检查、药物疗效,并采用目标基因捕获的二代测序技术和Sanger测序法对目前报道的50个候选基因进行测序分析.结果 30例患儿中有15例患儿存在有意义基因突变,其中13例患儿为IL-10RA突变,1例患儿为CYBB半合子突变,1例患儿为SLC37A4复合杂合突变.本研究观察到IL-10RA的8个突变位点及突变病例数分别为p.R101W(10例)、p.K173NfsX7(5例)、p.R165X (414)(2例)、p.R117H(2例)、p.P146fs(1例)、p.G141R(1例)、p.V100G(1例)和p.Y64C(1例).与15例基因无突变/无意义突变组患儿比较,基因突变组的15例患儿的起病中位年龄更低[0.5 (0.03,2)个月比4(0.23,9)个月,P=0.025];1月龄前起病的患儿所占比例更高(66.7％比26.7％,P＜0.05);合并肛周病变患儿所占比例更高(73.3％比26.7％,P＜0.05)和药物治疗后完全缓解率更低(46.7％比0,P＜0.01).结论 中国VEO-IBD患儿中单基因突变的阳性率较高,常见的为IL-10RA基因突变.基因突变的IBD患儿存在发病年龄小,更易合并肛周病变以及药物治疗缓解率低的特点.
