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组织块法培养大鼠颌下腺细胞的实验研究
目的 探讨组织块法培养大鼠颌下腺细胞(RSGC)的方法与细胞生长的特点.方法 采用组织块法培养RSGC,使用酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,免疫组织化学SABC方法进行细胞角蛋白-8免疫组化染色,进行细胞来源鉴定.倒置显微镜下进行形态学观察,取第2代RSGC,FDA-PI双色荧光法检测细胞活力,MTT法绘制生长曲线.结果 细胞角蛋白-8染色阳性.倒置显微镜下,细胞主要呈3种形态,为圆形亮细胞、多角形暗细胞、梭形暗细胞.细胞活力＞95%,生长曲线表示细胞5 d开始进入对数生长期.结论 此方法简便,易操作,获得了大量的RSGC,为颌下腺细胞作为种子细胞的颌下腺组织工程研究提供了实验基础和理论依据.
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小鼠原代血管平滑肌细胞改良分离方法的建立
目的:建立方便、快速、高效的小鼠原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的分离培养方法,为相关研究提供快速获取原代VSMC的方法技术.方法:分离小鼠主动脉,用Ⅰ型胶原酶消化血管组织去除内皮细胞等杂细胞;将血管切成1 mm2大小组织块种植于六孔细胞培养板孔底,用分离培养液诱导原代VSMC细胞的繁殖生长.光学显微镜观察细胞形态特征;免疫组化方法鉴定VSMC特异性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR方法检测VSMC特异性蛋白α-SMA和SM22α的mRNA表达水平.结果:本方法分离原代VSMC,3d后可见长梭状VSMC从组织块边缘长出,7d后可以进行传代.光学显微镜观察显示,分离细胞具有平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)形态特征;免疫组化分析显示,分离细胞α-SMA蛋白表达阳性;RT-PCR分析显示,分离细胞中a-SMA和SM22α在mRNA水平高表达.结论:本实验成功建立了一种简便、快捷、高效从组织块分离培养VSMC的改良方法,为快速获得原代VSMC提供了一种适用的方法技术.
