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Wnt-11及其受体在宫颈鳞癌中的表达及意义
目的 探讨Wnt-11及其受体在宫颈癌组织中的表达情况与宫颈癌各临床特征之间的关系.方法 2009年至2010年在我院收集43例宫颈癌组织、15例宫颈内瘤变组织、27例宫颈正常组织,用免疫组化及实时定量PCR方法分析Wnt-11及Ror2在宫颈正常组织和宫颈病变组织中的表达情况.结果 Wnt-11在宫颈癌及宫颈病组织中表达强度明显高于正常组织(P=0.030,0.006),与临床FIGO分期(P=0.020)、淋巴结转移(P=0.033)、人乳头瘤病毒(P=0.023)密切相关,差异有统计学意义.Wnt-11和ROR2基因在宫颈癌变及宫颈癌前病变组织中表达强度明显高于正常宫颈组织表达(P=0.002,0.039；P=0.000,0.014),差异有统计学意义.Wnt-11 mRNA与ROR2 mRNA表达与临床FIGO分期(P=0.000,0.000)、人乳头瘤病毒(P=0.008,0.011)密切相关,差异有统计学意义.Wnt-11 mRNA与ROR2 mRNA在宫颈癌的表达相关(r=0.826,P=0.000),差异有统计学意义.结论 Wnt-11、ROR2在宫颈癌中表达增强,其表达强度存在相关联系.Wnt-1l、Ror2在宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用.
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不同浓度Wnt-11诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞定向分化的实验研究
目的 探讨Wnt-11体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为心肌样细胞的适浓度.方法 采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMMSCs,取第2代BMMSCs培养48 h后进行定向诱导,根据Wnt-11终浓度的不同分为A组(100 ng/mL),B组(200 ng/mL),C组(400 ng/mL)和D组(空白对照组),诱导72 h后更换为完全培养液继续培养4周,D组仅用完全培养液培养.倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化.运用流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物进行鉴定.各组细胞培养至第4周时,运用免疫细胞化学染色技术检测结蛋白(Desmin)、间隙连接蛋白43(Connexin43)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达情况.运用透射电镜观察分化细胞的超微结构变化.实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组细胞在诱导后培养第1、2、4周时心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5及α-MHC的表达.结果 ①原代BMMSCs于第2周形成集落,多呈梭形、星形,少数形状不规则.传代后细胞体积变大,诱导后细胞多为长梭形,呈一致性生长.②流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物的鉴定结果显示CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.9%、0.4%和99.5%.③免疫细胞化学染色技术检测结果显示:诱导后常规培养至第4周,A组、B组、C组细胞胞质均呈阳性表达Desmin、Connexin43和cTnI,而D组细胞呈弱阳性或阴性表达,B组细胞的阳性表达率均高,差异具有统计学意义(P<0.05).④透射电镜结果显示:各诱导组细胞于诱导后常规培养至第4周,胞质内可见平行排列的肌丝及亚细胞结构如线粒体、粗面内质网和核糖体.⑤RT-qPCR检测结果显示:BMMSCs经诱导后,常规培养第1周时各诱导组细胞均表达GATA-4及Nkx2.5基因,在第2周时表达减弱,在第4周时表达增强,就基因表达而言,三个诱导组相比较,B组明显优于其他两组(P<0.05).α-MHC基因在诱导后常规培养期间均不表达.对照组细胞在常规培养期间GATA-4及Nkx2.5基因的表达量为1,而不表达α-MHC基因.结论 Wnt-11可在体外诱导SD大鼠BMMSCs定向分化为心肌样细胞,其诱导分化适浓度为200 ng/mL.
