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醛酮还原酶AKR7A1在活性醛引起的V79-4细胞损伤中的作用
目的 探讨醛酮还原酶AKR7A1在活性醛引起的细胞损伤中的作用.方法 采用AKR酶活性实验检测外源性AKR7Al蛋白在V79-4中国仓鼠肺细胞中的催化活性,使用caspase-3活性实验和基因突变致畸实验检测在V79-4细胞中过表达AKR7A1对活性醛引起的细胞凋亡和致畸作用的影响.结果 AKR酶活性实验结果显示:转染AKR7A1的V79-4细胞内还原酶活性显著升高,表明稳定表达的AKR7A1具有催化活性.caspase-3活性实验结果显示:稳定表达AKR7A1的V79-4细胞经10 μmol/L丙烯醛处理后,caspase-3活性显著低于对照细胞.致畸实验结果显示:表达转空载体的V79-4细胞在4-羟基壬烯醛处理后的突变率显著高于稳定表达AKR7A1的V79-4细胞.结论 稳定表达醛酮还原酶AKR7A1能显著提高V79-4细胞对丙烯醛引起的细胞凋亡和4-羟基-2-壬烯醛引起的致畸作用的抵抗力.
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人源醛酮还原酶7A2融合蛋白的纯化及其对苯代谢产物的催化活性
目的 使用FPLC系统纯化人源醛酮还原酶(AKR)7A2融合蛋白,并检测纯化的AKR7A2蛋白对苯的代谢产物的催化活性.方法 将含有His-AKR7A2的重组质粒转化至BL21大肠杆菌,通过IPTG诱导AKR7A2融合蛋白的大量表达；利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱和G25 Sephadex凝胶色谱柱纯化AKR7A2融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定.采用酶活性实验检测纯化的重组AKR7A2蛋白对苯甲醛、双苯醌和反向,反向-2,4-二烯-1,6-己二酮(MUC)的底物特异性.结果 使用FPLC系统通过两步纯化法成功获得重组的His-AKR7A2融合蛋白,纯度高达98％.酶活性实验结果显示:重组AKR7A2蛋白对苯甲醛有中等亲和力,对MUC亲和力较高,对双苯醌的亲和力较低.结论 成功纯化了重组人源AKR7A2蛋白,并检测了其对3种苯代谢产物的底物特异性,AKR很可能在苯的代谢途径中扮演重要角色.
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醛酮还原酶的研究进展
文章综述了醛酮还原酶的研究进展.醛酮还原酶(AKRs)是氧化还原酶超家族成员之一,目前已知有16个家族,超过190个家族成员,AKRs成员均属于单体胞质蛋白,以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)作为其辅酶,将醛酮类化合物还原成相应的醇类.近年来相关研究证实AKRs与多种疾病密切相关,因此,了解醛酮还原酶与多种疾病的关系意义重大.
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醛酮还原酶1-B1O在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨醛酮还原酶1-B10在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 通过荧光定量PCR法检测36例胃癌组织及其配对癌旁组织中AKR1B10 mRNA的表达量,采用免疫组织化学法检测100例原发胃癌组织及70例非肿瘤胃黏膜组织中AKR1B10蛋白表达情况.结果 PCR结果显示,91.7％(33/36)癌旁非肿瘤胃黏膜组织中AKR1B10 mRNA的表达高于其配对胃癌组织[8.3％(3/36),P=0.000].100例胃癌组织中33例(33.0％)AKR1B10蛋白阳性表达,70例非肿瘤胃黏膜上皮中65例(92.9％)AKR1B10的阳性表达,两者比较,差异有统计学意义(P=0.000).胃癌组织中AKR1B10的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及分化程度无关(P＞0.05),而与肿瘤大小(P=0.000)、浸润深度(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.028)、远处转移(P=0.031)和临床TNM分期(P=0.000)有关.AKR1B10阳性表达患者的5年生存率显著高于阴性表达者(60.6％比32.8％,P＜0.01).结论 胃癌组织中AKR1B10的表达下调与胃癌进展有关,提示预后不良.
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敲减AKR1A1基因对H2O2及4-羟基壬烯醛诱导的1321N1脑星形细胞瘤细胞损伤的影响
目的 初步探讨星形胶质细胞瘤细胞中的醛酮还原酶1A1(AKRIA1)在抗氧化应激和有毒醛代谢中的作用.方法 通过LipofectamineTM RNAiMax以siRNA转染1321N1细胞,用Western blot法和qRT-PCR检测1321N1细胞中AKR1A1基因抑制水平.siRNA转染后的细胞经H2O2和4-羟基壬烯醛处理后使用MTT法检测细胞成活率；采用2 ',7’-二氯二氢荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)标记法检测敲减AKR1A1基因对H2O2诱导的1321N1细胞内活性氧(ROS)水平的影响.结果 Western blot法和qRT-PCR结果显示1321N1细胞经特异性siRNA转染后,AKR1A1基因的表达受到明显抑制(70％).MTT法检测结果显示,siRNA-AKR1A1转染后的1321N1细胞在H2O2或4-羟基壬烯醛压力下的细胞成活率显著降低,而且敲减AKR1A1的1321细胞内H2O2诱导的ROS水平显著高于对照细胞.结论 使用的特异性siRNA能有效抑制AKR1 A1基因在1321N1星形细胞瘤细胞中表达,AKR1A1参与1321N1脑星形细胞瘤细胞中的4-羟基壬烯醛代谢,并且很可能参与调节脑细胞的抗氧化应激机制.
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醛酮还原酶AKR7A5蛋白的纯化及其对萘醌类化合物的底物特异性研究
[目的]探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性.[方法]IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的AKR7A5蛋白.使用AKR酶活性实验检测纯化的重组AKR7A5蛋白对萘醌类化合物的底物特异性.[结果]经SDSPAGE和Western blot验证,成功纯化了His标签的AKR7A5融合蛋白；AKR酶活性实验结果显示,重组AKR7A5蛋白对散沫花醌有中等亲和力,对胡桃醌和维生素K3有较低的亲和力,对1,4-萘醌无亲和力.[结论]成功纯化了重组AKR7A5蛋白,并检测了其对萘醌类化合物的底物特异性,结果表明醛酮还原酶很可能选择性地参与萘醌类化合物的代谢.
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过表达醛酮还原酶AKR7A1对巴豆醛致畸作用的影响
目的:探讨过表达大鼠醛酮还原酶AKR7A1蛋白对巴豆醛致畸作用的影响.方法:使用Western blot法和醛酮还原酶(AKR)酶活性技术检测并鉴定外源性AKR7A1在V79-4细胞中的表达水平和催化活性,使用HGPRT基因突变实验检测在V79-4细胞中过表达AKR7A1对巴豆醛致畸作用的影响.结果:Western blot检测显示V79-4细胞中表达高水平的AKR7A1蛋白；AKR酶活性实验结果显示过表达的AKR7A1蛋白具有催化活性；HGPRT基因突变实验结果显示过表达AKR7A1的V79-4细胞对巴豆醛致畸作用的抵抗力明显高于对照细胞.结论:过表达大鼠AKR7A1能显著提高V79-4细胞对巴豆醛致畸作用的抵抗力.
