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摇晃蛋白引起神经元分枝并促进树突发育
目的:研究摇晃蛋白与神经元迁移和发育的关系.方法:通过子宫内电击转染质粒pCAG-GFP到胚胎小鼠大脑皮质,标记迁移中的单个神经元.通过免疫组化染色,观察位于大脑皮质不同层中迁移和分化神经元的形态,统计分析神经元顶突起长度与神经元分枝的关系.结果:摇晃蛋白局限性分布于发育中大脑皮质的边缘带.当神经元顶突起接触到含摇晃蛋白的边缘带后,神经元顶突起缩短并开始出现分枝,而且,神经元的剩余顶突起的长度与总的分枝长度呈极显著负相关,且与分枝点的数目呈极显著负相关.结论:摇晃蛋白促进神经元顶突起的分枝并与树突的发育有关.
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子宫内电击转染技术在神经元树突棘发育及神经纤维归巢研究中的应用
目的:建立鼠胚子宫内电击转染技术体系(In utero electroporation,IUE),探究该技术在研究神经元发育包括树突棘形成及神经纤维归巢(轴突投射)中应用的可行性.方法:构建带pCAG启动子表达绿色荧光蛋白(Green fluorescentprotein,GFP)的质粒,并将该质粒利用子宫内电击转染技术转染到孕期15.5 d(E15.5)鼠胚大脑皮质的新生神经元中.待小鼠出生后(P0)及第28 d(P28)用4％多聚甲醛活体灌注固定,振荡切片机切片,免疫荧光组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察拍照.结果:在出生后P28小鼠被转染一侧的大脑皮质内有大量被GFP标记的细胞,呈现典型的神经元形态特征,从胞体发出大量树突,树突表面有大量大小不等、形态不一的小棘,被标记神经元的轴突通过胼胝体投射到对侧海马和大脑皮质.结论:子宫内电击转染技术能成功转染大脑皮质神经元,由CAG启动的GFP表达载体能够在被转染的神经元中长时程高效表达GFP,并标记被转染神经元的所有细胞结构包括树突、轴突及树突棘,该技术可用于研究各种不同基因在小棘发育及神经纤维归巢中的作用.
