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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗在小鼠体内诱导特异性免疫应答能力的研究
目的:观察已构建的pcIL-18一MAGE共表达质粒疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况.方法:质粒大量制备肌注小鼠,每隔10天加强免疫1次,共免疫3次.末次免疫后7天,收集血清及脾细胞,流式细胞术检测小鼠T细胞亚群情况及血清中抗MAGE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性.结果:pclL-18、pcMAGE-1、pcIL-l8+pcMAGE-1及pcIL-18-MAGE免疫组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及MAGE-1抗体的产生均高于pcDNA3免疫组(P＜0.05),且pcIL-18-MAGE共表达免交组高于pcIL-18+pcMAGE-1共同注射组(P＜0.05).pcIL-18-MAGE免疫组对SMMC-7721的杀伤活性高.结论:pcIL-18-MAGE共表达基因疫苗接种小鼠与其它实验小鼠相比,可以有效产生更好的特异性免疫应答.
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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建与体外表达
目的 构建MAGE-1与IL-18共表达质粒pcIL-18-MAGE并进行体外验证表达.方法 设计合成MAGE-1与IL-18引物,PCR扩增其基因片段,分别构建以pcDNA3为载体的小鼠IL-18重组质粒和人MAGE-1重组质粒,pcCMV-IL-18与MAGE-1的PCR产物酶切连接构建共表达质粒pcIL-18-MAGE.脂质体法将构建的重组质粒转染293细胞,RT-PCR和 Western 印迹法验证MAGE-1和IL-18在转化细胞中的表达.结果 成功获得共表达质粒pcIL-18-MAGE,RT-PCR可见目的条带,Western 印迹显示转染MAGE-1与IL-18的细胞在蛋白质水平上均有表达.结论 成功地构建出既表达mIL-18又表达MAGE-1的共表达质粒pcIL-18-MAGE.
