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利用抑制消减杂交技术(SSH)研究与Ty21a免疫相关的基因
目的:利用抑制消减杂交技术(SSH)筛选与Ty21a免疫相关的新基因.方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为driver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因.结果:通过SSH技术和cDNA徽矩阵技术,发现了7条与GenBank中已公布的表达序列标签(expressedsequence tag,EST)片段没有明显同源性,可能为Ty2Ia免疫相关的新基因.其中3条正在用RACE-PCR法进行获得全长cDNA的工作.结论:SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,Ty21a可诱导多种免疫相关新基因的表达.
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伤寒疫苗的发展与现状
伤寒因高度的传染性和沉重的疾病负担,构成较大的全球健康问题.执行适合的食品加工程序和建立安全的供水系统是有效预防伤寒的基石.然而,伤寒疫苗依然是有效预防伤寒的重要工具.现有两种批准的疫苗,具有很好耐受性和效力.其中Vi多糖亚单位疫苗是肌肉或皮下注射接种,另一种减毒活疫苗则口服接种.本文就各种伤寒疫苗研制方法的优缺点及潜在的候选疫苗加以讨论.
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伤寒减毒活疫苗Ty21a免疫前后小鼠肠细胞差异表达的基因
以基因表达谱芯片对Ty21a免疫前后小鼠肠细胞(包括肠粘膜上皮细胞和肠上皮间淋巴细胞)基因表达的差异性进行研究比较.将490条经抑制消减杂交法筛选出的与小鼠Ty21a免疫相关的cDNA制备成表达谱芯片;利用免疫前后小鼠肠细胞的mRNA通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制备成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,单点重复2次实验,通过计算机数据处理判定基因是否在上述两种细胞群中有表达差异.筛选出差异表达基因共98条,其中92条为表达上调基因,6条为表达降低基因.提示,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,可同时定量研究大量的基因表达水平,从而鉴定可能参与免疫的基因.
