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新城疫病毒(Newcastle disease virus)文献资料
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检测NDV诱导特异性细胞免疫的ELISPOT试验方法建立
目的:建立检测新城疫病毒(NDV)诱导特异性细胞免疫的ELISPOT试验方法,实时分析NDV免疫鼠的IFN-γ水平.方法:用NDV单克隆抗体包被96孔混纤板,在反应孔中加入小鼠脾淋巴细胞和NDV刺激抗原,37℃,5%CO2培养7小时.裂解细胞,依次加入酶标二抗、底物、显色液,倒置显微镜下计数ELISPOT斑点.结果:ELISPOT试验的特异性与培养时间和刺激抗原浓度密切相关.在106/孔的脾淋巴细胞浓度下,培养时间越长、刺激抗原越多,试验的特异性越低;当培养时间为7小时,抗原量为5 μg/孔时,试验的特异性强.ELISPOT斑点数,随细胞浓度的增加而增加,当小鼠的脾淋巴细胞浓度为106/孔时,有利于斑点的计数,试验误差小.结论:试验成功建立了检测NDV细胞免疫的ELISPOT方法,可用于NDV细胞免疫的研究.
