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人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达
目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性.方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN.用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404,经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α2b基因导入人参愈伤组织细胞.经G418筛选,形成阳性细胞.用PCR、RT-PCR、Western blot和WISH/VSV系统检测转基因组织.结果:经PCR检测表明hIFN-α2b基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中.RT-PCR证明存在hIFN-α2b基因的转录产物.Western blot分析表明转基因人参愈伤组织细胞能有效表达hIFN-α2b 蛋白.WISH/VSV系统检测分析表明表达的hIFN-α2b具有生物学活性.结论:本研究利用转基因人参愈伤组织细胞成功地表达了人干扰素,为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础.
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表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立
目的 建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系.方法 将已构建成的植物表达载体pBI 121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验.结果 表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同.Western blot检测显示,在相对分子质量约17 000处有特异蛋白反应带.ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31 μIU/ml.小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显.结论 人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达.
