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巨噬细胞Coronin-1的表达与非Mtb源性自噬相关性的实验研究
目的：研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法：分别构建过表达Coronin-1的pEGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的pGenesil-1-Coronin-1质粒，通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株，即 Coronin-1高表达细胞株（ RAW264.7-Cor.Plus ）和 Coronin-1低表达细胞株（ RAW264.7-Cor.Minus ）。将RAW264.7-Cor.Plus组、RAW264.7组和RAW264.7-Cor.Minus组细胞分别采取完全培养基（空白处理对照）、饥饿、雷帕霉素、环孢素A等因素处理后，通过RT-PCR法检测Beclin-1的基因转录水平，Western blot法检测Coronin-1、LC3BⅡ／LC3BⅠ及Beclin-1的蛋白表达水平。结果：Coronin-1过表达质粒和siRNA质粒均构建成功，其细胞稳定筛选株具有过表达或抑制表达Coronin-1特性。①空白处理三组细胞，Western blot法检测LC3BⅡ／LC3BⅠ的比值：RAW264.7-Cor.Minus组＞RAW264.7组＞RAW264.7-Cor.Plus组；Western blot法检测Beclin-1：RAW264.7-Cor.Minus组＞RAW264.7组＞RAW264.7-Cor.Plus组；RT-PCR法检测Beclin-1转录水平，趋势同Western blot；②饥饿处理三组细胞， LC3BⅡ／LC3BⅠ的比值：RAW264.7-Cor.Minus 组＜RAW264.7组＜RAW264.7-Cor.Plus组；③雷帕霉素处理RAW264.7细胞，其Coronin-1蛋白被显著抑制；雷帕霉素和环孢素A分别处理RAW264.7-Cor.Plus细胞，其LC3BⅡ／LC3BⅠ比值明显较空白处理组高。结论：巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬具有相关性。在营养充足状态下，Coronin-1可抑制细胞自噬；在饥饿状态下，Coronin-1可促进细胞自噬。 Coronin-1对自噬的调控可能与mTOR和钙离子信号通路有关。
