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布鲁菌S2株诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡及免疫激活的研究
目的:研究猪布鲁菌S2株诱导巨噬细胞(M(φ))的凋亡、活化及对T淋巴细胞的激活作用.方法:用猪布鲁菌S2株体外感染M(φ),并以大肠埃希菌作为对照,采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化；流式细胞仪测定感染后24小时M(φ)的凋亡率；ELISA法检测感染后不同时间点M(φ)培养上清中IL-12和TNF-α及感染后M(φ)与T细胞共培养上清中IFN-γ的含量的变化.结果:瑞氏-姬姆萨染色显示布鲁菌S2株感染M(φ)后1小时体积明显增大,突起增多,胞浆内可见大量布鲁菌；6小时细胞内细菌减少,但胞膜仍完整;至12小时细胞核固缩,胞膜失去完整性.流式细胞仪检测结果显示,感染后24小时M(φ)的凋亡率均明显高于正常对照组及大肠埃希菌感染组(P＜0.05).ELISA结果显示S2株感染M(φ)12、24、48小时的上清中IL-12和TNF-α含量均明显高于正常对照组(P＜0.01),S2株感染后M(φ)与T细胞共培养24、48、72小时产生的IFN-γ量高于正常对照组(P＜0.05),但低于大肠埃希菌感染组(P＜0.01).结论:S2株可以引起M(φ)的凋亡,同时可诱导M(φ)活化,产生IL-12和TNF-α;布鲁菌感染后的M(φ)可诱导T细胞活化,产生IFN-γ免疫应答.
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布鲁菌S2株感染巨噬细胞与树突状细胞的比较
目的 比较猪布鲁菌S2菌株感染巨噬细胞和树突状细胞(DC)的特点.方法 采用瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态并计算吞噬率；用ELISA法测定细胞培养上清中的IL-12和TNF-α以及与T细胞共培养上清中IFN-γ和IL-4的含量；用annexin-V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 感染S2菌株1h后巨噬细胞的吞噬率为(43.6±4.8)％,显著高于DC的吞噬率(13.08±2.36)％ (P ＜0.05)；正常巨噬细胞凋亡率为(3.09±1.21)％感染S2菌株后6、12和24h的凋亡率分别为(19.89±1.36)％、(22.73±2.21)％和(42.44±3.12)％,明显高于DC感染后相同时间点的凋亡率(P＜0.05),正常DC凋亡率为(1.82±0.01)％,DC感染S2菌株6、12、24h凋亡率分别为(3.76±0.13)％、(7.87±0.56)％和(9.08±0.23)％.巨噬细胞在感染S2菌株后24、48 h分泌的IL-12均明显低于DC分泌IL-12的量(P＜0.05)；24、48、72 h分泌的TNF-α量均明显低于DC(P ＜0.01)；在24、48、72 h与T细胞共培养分泌的IFN-γ含量均明显低于DC(P＜0.01).结论 巨噬细胞吞噬猪布鲁菌S2菌株的能力高于DC,猪布鲁菌S2感染后巨噬细胞的凋亡率高于DC,感染S2菌株后DC的活化及提呈抗原并激活T细胞的能力强于巨噬细胞.
