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布鲁菌S2株诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡及免疫激活的研究
目的:研究猪布鲁菌S2株诱导巨噬细胞(M(φ))的凋亡、活化及对T淋巴细胞的激活作用.方法:用猪布鲁菌S2株体外感染M(φ),并以大肠埃希菌作为对照,采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化；流式细胞仪测定感染后24小时M(φ)的凋亡率；ELISA法检测感染后不同时间点M(φ)培养上清中IL-12和TNF-α及感染后M(φ)与T细胞共培养上清中IFN-γ的含量的变化.结果:瑞氏-姬姆萨染色显示布鲁菌S2株感染M(φ)后1小时体积明显增大,突起增多,胞浆内可见大量布鲁菌；6小时细胞内细菌减少,但胞膜仍完整;至12小时细胞核固缩,胞膜失去完整性.流式细胞仪检测结果显示,感染后24小时M(φ)的凋亡率均明显高于正常对照组及大肠埃希菌感染组(P＜0.05).ELISA结果显示S2株感染M(φ)12、24、48小时的上清中IL-12和TNF-α含量均明显高于正常对照组(P＜0.01),S2株感染后M(φ)与T细胞共培养24、48、72小时产生的IFN-γ量高于正常对照组(P＜0.05),但低于大肠埃希菌感染组(P＜0.01).结论:S2株可以引起M(φ)的凋亡,同时可诱导M(φ)活化,产生IL-12和TNF-α;布鲁菌感染后的M(φ)可诱导T细胞活化,产生IFN-γ免疫应答.
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重组水疱性口炎病毒载体疫苗皮下免疫效应的初步研究
柯萨奇B组病毒(CVB3)是导致人类急慢性心肌炎、扩张性心肌病的重要病原体之一.目前还没有疫苗或有效的药物防治病毒性心肌炎,我们观测了以水疱性口炎病毒VSV为载体的疫苗皮下免疫诱导的CVB3特异性免疫应答及保护效果,并比较了与传统蛋白疫苗之间的差异.以VSV为载体的病毒疫苗在小鼠模型中通过皮下免疫可以诱导强劲的体液免疫和T细胞免疫,但与VP1蛋白疫苗比较,除了分泌IFN-γ的T细胞外差异无统计学意义.VSV-VP1免疫组(一次免疫)的保护效果略好于VP1蛋白免疫组(三次免疫),提示VSV-VP1疫苗保护效果增加的可能原因是VSV VP1皮下免疫诱导的特异性分泌IFN-γ的T细胞的比例增加,以上实验结果为水疱性口炎病毒作为疫苗载体应用提供了理论基础.
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CD4+T细胞免疫应答介导小鼠抗GBM肾小球肾炎
目的 探讨CD4+T细胞免疫应答在小鼠抗GBM肾小球肾炎中的作用.方法 将C57BL/6小鼠随机分为肾炎模型组和正常对照组,两组均给予兔IgG预致敏,10d后肾炎模型组给予兔抗GBM血清(0.2 mL/20 g)尾静脉注射,正常对照组给予正常兔血清,分别于第7、14、21、28天行以下处理:收集尿和血清样本检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和尿蛋白/尿肌酐(UmAlb/c)的含量；光镜和电镜观察肾组织病理学改变；流式细胞仪检测淋巴器官和肾脏局部免疫细胞分布情况；Real-time PCR检测肾组织中IFN-γ、IL-4、IL-17A、TGF-β1、CCL-2、CCL-4、CCL-5和CXCL-1等细胞因子mRNA的含量；ELISA检测血清中IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-12、IL-10和TGF-β1等细胞因子的表达水平.结果 与正常对照组小鼠相比,肾炎模型组小鼠的Scr、BUN和UmAlb/c均明显升高(P＜0.05)；光镜下可见典型新月体肾炎样病理改变,免疫荧光可见兔IgG和鼠IgG沿GBM呈线性沉积；小鼠脾脏中Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例明显增加,同时肾脏局部有大量Th1、Th2和Th17细胞浸润；血清及肾脏局部IFN-y、IL-4、IL-17A和TGF-β1等细胞因子表达水平相应上调.结论 CD4+T细胞免疫应答能介导小鼠抗GBM肾小球肾炎并在其病理进程中发挥促进作用.
