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黄芪多糖抑制小鼠EAE及调控BV-2神经小胶质细胞活化的实验研究
目的:研究黄芪多糖(APS)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的治疗作用以及对参与EAE发病机制的神经小胶质细胞活化的调控作用及其可能的作用机制.方法:动物实验:MOG35-55诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,予APS给药干预,通过5级临床症状评分观察APS对小鼠EAE的治疗作用.细胞实验:MTT法检测脂多糖(LPS)对于BV-2神经小胶质细胞的增殖抑制作用,筛选合适的LPS刺激浓度活化神经小胶质细胞,构建BV-2神经小胶质细胞活化的模型;倒置显微镜观察BV-2神经小胶质细胞形态学的改变;ELISA法检测BV-2神经小胶质细胞IFN-γ、TNF-α的分泌水平变化;观察不同浓度的APS对BV-2神经小胶质细胞活化的调控作用;APS干预后,Western blot、Real-time PCR方法分别检测BV-2神经小胶质细胞PD-L1蛋白和mRNA表达水平的变化.结果:APS能够有效治疗小鼠EAE的临床症状,成功建立了体外BV-2神经小胶质细胞活化模型,一定浓度的APS能够抑制BV-2神经小胶质细胞的活化,提高活化的BV-2细胞的生存活性,降低IFN-γ、TNF-α的分泌水平,促进活化的BV-2神经小胶质细胞PD-L1基因及蛋白表达上调.结论:APS对小鼠EAE具有明显的治疗作用,其发挥作用的机制可能是APS能够有效抑制神经小胶质细胞的活化,降低炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α的分泌,对神经小胶质细胞有抗炎保护作用,PD-1/PD-L1通路可能是APS发挥抗炎作用的重要途径.
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miRNA-467b在EAE中对炎性T细胞浸润的影响
为探讨miRNA-467b在实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中对炎性T细胞浸润的影响,我们首先采用real-time PCR及FACS方法检测EAE小鼠脾脏单个核细胞中CXCR3、CCR5、CCR2、CCR6的mRNA和蛋白表达水平,并在MOG反应性T细胞中过表达miRNA-467b,FACS方法检测趋化因子受体CXCR3、CCR6的表达变化,并进一步通过Boyden小室(transwell实验)的方法,体外观察miRNA-467b对细胞迁移的影响.结果发现,EAE小鼠脾脏中CCR5、CCR2、CCR6的转录及蛋白表达水平显著上升,在MOG特异性的T细胞中过表达miRNA-467b后,可降低Th1表面趋化因子受体的表达,减少Th1向transwell板下室中的迁移,提示miRNA-467b可以通过影响细胞的迁移进而调节EAE的疾病进程.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 趋化因子受体 miRNA 迁移 -
黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠的治疗作用及机制研究
目的:观察中药黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)小鼠的治疗作用,并探讨其免疫调节机制.方法:建立C57BL/6小鼠EAE模型,通过5级临床症状评分观察黄芪对EAE小鼠的治疗作用;HE染色观察黄芪对EAE小鼠脊髓炎症细胞浸润的影响;CCK-8法检测脾脏髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)多肽MOG35-55特异性T细胞增殖情况;ELISA法检测脾脏MOG35-55特异性T细胞培养上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4的水平.结果:黄芪能够有效抑制EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统的炎性反应,抑制MOG35-55特异性T细胞增殖及IFN-y 、TNF-o、IL-17的分泌,促进IL-4的分泌.结论:黄芪能够有效抑制中枢神系统的自身免疫反应,这种作用与其抑制MOG35-55特异性T细胞增殖,减少Th1、Th17型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌相关.
关键词： 黄芪 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 T细胞增殖 细胞因子 -
α-硫辛酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型干预的初步研究
目的 研究α-硫辛酸(α-LA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型干预的有效性,探讨α-LA临床治疗多发性硬化的可能性.方法 Wistar大鼠30只,其中22只制作EAE模型,分为α-LA干预组(11只)及免疫组(11只),另8只为非免疫组.α-LA干预组大鼠于免疫当天开始每天1次腹腔注射α-LA(100 mg/kg),至实验28 d结束处死日止;免疫组及非免疫组大鼠每天腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液.对各组大鼠进行神经功能缺损评分、病理学及免疫组织化学检查.结果 α-LA干预组的EAE发病率为5/11,显著低于免疫组的9/11(P<0.01).α-LA干预组大鼠免疫后第14天及第16～28天的神经功能缺损评分显著低于免疫组(P值均<0.05).α-LA干预组大鼠脑组织切片脱髓鞘病灶数为(3.85±1.21)个,脊髓组织切片病灶数为(4.26±2.65)个,均显著少于免疫组的(9.09±5.61)和(14.45±5.10)个(P值均<0.05).免疫组织化学髓鞘碱性蛋白(MBP)染色也显示,α-LA干预组病理切片的髓鞘松散、脱失明显轻于免疫组.结论 α-LA能显著改善EAE大鼠的神经功能,干预EAE的发病.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 干预 α-硫辛酸 -
视神经炎小鼠视网膜形态结构和视觉功能的变化
目的 研究视神经炎小鼠发病过程中视网膜形态结构和视觉功能的变化.方法 50只C57BL/6小鼠随机分为对照组(10只)和实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组(40只),EAE组应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendroglia glycoprotein,MOG)35-55多肽加完全弗氏佐剂皮下注射免疫建立视神经炎模型.对照组和EAE组小鼠分别于免疫当天,免疫后第7、14、20、30天,进行闪光视觉诱发电位(flash visual evoked potential,F-VEP)和闪光视网膜电图(flash electroretinogram,F-ERG)检查,采用勒克斯坚牢蓝(Luxol fast blue,LFB)染色评估视神经的髓鞘脱失程度；采用原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)检测视网膜神经节细胞凋亡并计算其凋亡指数.结果 在免疫后第7天,F-ERG中b波振幅有降低趋势,潜伏期延迟,和对照组比较有统计学差异(P＜0.05)；F-VEP结果和对照组比较无统计学差异(P＞0.05)；在免疫后第14天,视神经开始出现不同程度的髓鞘脱失；F-VEP中P100波潜伏期明显延迟,振幅明显降低,和对照组比较有统计学差异(P＜0.05)；TUNEL检测,EAE组有明显的视网膜神经节细胞(ratinal ganglion ceils,RGCs)凋亡,与对照组比较有统计学差异(P＜0.05).凋亡指数随病程的延长而升高.结论 F-ERG和F-VEP可以在一定程度上反映视神经炎临床前期的视觉功能,为评估病情程度提供依据；早期RGCs的凋亡提示,对视神经炎进行及时神经保护治疗是必要的.
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黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护机制
目的 观察黄芪糖蛋白(Huangqi Glycoprotein,HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠的干预作用,并探讨其可能的保护机制.方法 复制MOG35-55多肽诱导的C57BL/6雌性小鼠EAE模型,随机分为EAE对照组和HQGP治疗组.通过5级临床症状评分和小鼠体重变化观察HQGP对EAE小鼠的保护效应;取小鼠脊髓进行HE染色和髓鞘固蓝染色观察HQGP的神经保护作用;免疫荧光组织化学染色检测小鼠脊髓相关免疫细胞数量的变化;ELISA法检测脾脏单个核细胞(Mononuclear Cells,MNCs)培养上清液中相关细胞因子的水平.结果 HQGP有效缓解了EAE小鼠的临床症状,推迟发病时间,减轻中枢神经系统的炎性反应和髓鞘脱失;HQGP能减少小鼠脊髓CD4+T细胞、CD68+巨噬细胞和CDllb+细胞的数量,并能明显抑制小鼠IL-17、TNF-α、IL-12的分泌,促进IL-4、IL-10、IFN-γ的分泌.结论 HQGP具有治疗EAE的潜在作用,其作用机制与抗炎和免疫调节有关.
关键词： 黄芪糖蛋白 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 T细胞 细胞因子 免疫调节 -
异基因骨髓间充质干细胞移植对EAE小鼠的治疗作用
目的 探讨异基因骨髓间充质干细胞(BMSC)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的治疗作用及相关免疫调节机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)多肽片段诱导建立C57BL/6J小鼠EAE模型；分离纯化培养BALB/c小鼠BM-SC,对EAE模型小鼠进行移植,移植前后对EAE小鼠进行神经功能评分；流式细胞术检测小鼠淋巴器官CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞(Treg)的数量；荧光定量RT-PCR检测小鼠脾脏IL-2、IL-4、IL-17和IL-23 mRNA水平的表达.结果 异基因BMSC移植后小鼠神经功能评分明显改善；BMSC移植组小鼠胸腺、脾脏、淋巴结Treg数量显著增加；脾脏中IL-2、IL-17表达显著下降,同时IL-4、IL-23表达显著增加.结论 异基因BMSC移植通过调节免疫系统的Treg数量和CD4+T细胞分泌细胞因子的水平对EAE起治疗作用.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 骨髓间充质干细胞 调节性细胞 免疫调节 -
雌激素对大鼠脾脏单核细胞衍生的树突状细胞分化和功能的影响
目的:研究雌激素是否可通过影响树突状细胞(DC)而调控实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)大鼠的免疫应答.方法:在细胞因子和不同浓度的17β-雌二醇存在下,从大鼠脾脏单核细胞培养DC,用流式细胞仪检测DC表面分子,通过抗原提呈实验观察雌二醇处理的DC(E2-DC)抗原提呈能力是否改变.用含髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP68-86)的佐剂免疫大鼠,观察皮下或静脉注射E2-DC对EAE大鼠免疫应答是否有影响.结果:17β-雌二醇可加速DC分化,特征性表现为CD11 c、共刺激分子B7-2和CD40的上调,而抗原提呈能力未有改变.在DC和T细胞共培养的上清液中,IFN-γ分泌下降而IL-10水平升高.给免疫5 d的EAE大鼠静脉注射E2-DC,可激活淋巴结细胞的免疫应答,如提高细胞增殖能力和细胞因子产生,而脾脏产生MBP特异性抗体的细胞数量减少.结论:雌激素能影响DC的分化和功能,导致Th2细胞因子产生,这可能与其对EAE的保护作用有关.
关键词： 多发性硬化症 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 树突状细胞 雌激素
