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抗H5N1禽流感病毒羊驼重链单域抗体的制备和功能鉴定
目的:获得具有中和活性、高特异性和稳定性的抗H5N1禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的羊驼重链单域(VHH)抗体.方法:利用pET-22b表达载体诱导表达抗H5N1禽流感病毒HA VHH抗体蛋白,以包涵体形式表达的VHH抗体蛋白采用优复性方法进行复性后,获得高纯度的VHH抗体,分别采用ELISA法鉴定VHH抗体的亲和力和热稳定性,采用血凝抑制实验鉴定抗体的特异性和体外中和活性.结果:经复性的抗H5N1禽流感HA VHH抗体对H5N1禽流感病毒HA具有良好的特异性.通过对三种不同复性方法比较,利用柱上复性的VHH23抗体具有较好的热稳定性,亲和力为9.1×10-7 mol/L,同时对H5N1禽流感病毒HA具有良好的体外中和活性.结论:实验结果表明通过原核表达获得具有较好中和活性、特异性及稳定性的抗H5N1禽流感病毒VHH抗体,为进一步开展抗体的体内病毒中和试验奠定良好基础.
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乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白重链可变区抗体体外抑制病毒的复制
目的 用蛋白片段互补法(PCA)选择HBV多聚酶末端蛋白(TP)重链可变区(VH)抗体,研究特异性VH抗体体外抑制HBV的复制与分泌.方法 以HBV多聚酶TP区为抗原,用PCA法进行特异性VH抗体筛选.特异性VH抗体基因定向亚克隆人真核表达载体pZeoSV2(+),构建pZeoSV2(+)-VH重组质粒,用脂质体介导的转染技术,将其导入HepG 2.2.15细胞,观察特异性抗体的生物学活性.结果 用PCA法从抗体库中选择出3个特异性抗体:VH1、VH2和VH3,其中与抗原亲和力高的是VH1.转染pZeoSV2(+)-VH1的HepG 2.2.15细胞比未转染pZeoSV2(+)-VH1或只转染空载体pZeoSV2(+)的HepG 2.2.15细胞病毒颗粒分泌明显减少,上清液内为2.978 7±0.276 1比5.150 4±0.276 1和5.295 1±0.241 0(P＜0.05);细胞内为5.283 9±0.162 9比8.300 4±0.323 2和8.532 1±0.138 3(P＜0.05).结论 用PCA法可从抗体库中选择出HBV多聚酶TP区特异性VH抗体,该抗体在体外可抑制HBV的复制与分泌.
