首页 > 文献资料
-
白内障患者晶状体特异性表达基因LEP503的检测及分析
晶状体上皮细胞表达很多基因,但绝大多数基因不会限制在晶状体中.近年来研究表明,晶状体上皮细胞特异性基因表达可能在其生长、分化、细胞损伤修复这些特殊过程起了关键的作用.Wen等[1-3]从大鼠的晶状体上皮细胞中克隆出一种新的基因,将其命名为LEP503.LEP503在正常人晶状体上皮细胞中特异性表达,并通过实验分析LEP503基因可能与分化有关.为进一步研究LEP503在白内障患者中是否表达,是否有规律性及是否与增殖有关,对不同年龄的白内障患者的晶状体前囊膜LEP503基因表达情况进行了分析.
-
特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
目的 构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product 503)调控的Lenti- LEP503 -HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用.方法 用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503 - HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti- CMV-HSV-tk-EGFP.将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达.将Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV -HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的袁达,用流式细胞仪及PT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异.结果 Lenti-LEP503-HSV -tk-EG FP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低干Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP.转染Lenti-LEPS03-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg· L-1 GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化；GCV作用24h后Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强.结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制 HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/G CV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子.
-
晶状体上波细胞特异性表达基因LEP503检测及分析
目的研究晶状体上皮细胞特异表达基因LEP503在不同年龄白内障患者以及正常人晶状体中的表达情况,并探讨白内障发生机制.方法收集白内障患者晶状体前囊膜20例(白内障低龄组和高龄组)、无白内障发生的晶状体前囊膜20例(对照低龄组和高龄组).通过RT-PCR和Western-Blotting技术检测各组LEP503基因和蛋白表达情况,凝胶成像分析系统比较各组之间LEP503表达的差异.利用SPSS12.0软件包进行t检验和线性回归统计学分析.结果 RT-PCR和凝胶成像分析结果显示:白内障组LEP503基因表达明显比正常对照组高(P<0.01);其中白内障高龄组LEP503基因表达明显比低龄组高(P<0.01);Western-Blotting结果显示:白内障患者LEP503蛋白表达量明显比正常人高,且年龄越大,LEP503蛋白表达越强.结论 (1) LEP503基因在白内障患者中有表达且比正常人高;(2) 白内障患者LEP503基因的表达量与患者年龄之间呈线性关系;(3) LEP503基因与晶状体上皮细胞增生没有直接关系;(4) LEP503基因可能参与了老年人白内障和青年人白内障不同发病机制过程.
