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延边地区健康人群Nelin基因单核苷酸多态性研究
目的 分析延边地区健康人群Nelin基因单核苷酸多态性(SNP)的分布特征.方法 采用DNA序列测定技术,检测114例延边地区健康人Nelin基因外显子及外显子/内含子连接区的核苷酸序列.利用核酸序列分析软件与Genbank的Nelin基因序列比对,对SNP位点进行序列分析.结果 通过对4个外显子SNP位点的序列分析,共发现2个SNP位点.其中1个为NCBI数据库中报道的rs1166698位点,新发现1个位点,NCBI数据库中报道的本研究人群中没有发现的位点3个.rs1166698位点为第8外显子区G/A错义突变(48364365 G/A),其基因型频率为GG:31.6%,GA:52.6%,AA:15.8%,等位基因频率为G:57.9%,A:42.1%.通过对延边地区人群该位点的民族、性别比对分析,基因型、等位基因频率在朝汉族、男女间的分布无明显差异.新发现的位点是第9外显子区A/G错义突变(1195 A/G),基因型AA占88.6%(101/114),AG占11.4%(13/114),未发现突变纯合子GG基因型.结论 通过本研究了解了延边地区Nelin基因相关SNP位点遗传分布特征,为研究Nelin基因多态性与疾病的关系奠定了基础.
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下肢静脉曲张患者外周血Nelin水平测定及意义
目的 探讨下肢静脉曲张患者与正常人外周血中Nelin表达水平的差异及其意义.方法 选取下肢静脉曲张患者57例为对照组,健康查体者60例为正常组,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中Nelin mRNA的表达水平,利用生物素双抗体夹心ELISA技术测定外周血血清中Nelin蛋白的表达水平.结果 RT-PCR结果显示,Nelin在对照组与正常组的相对表达量分别是0.226±0.070、0.718±0.114,两组差异有统计学意义(t=9.028,P＜0.01);ELISA结果显示,96例血清中均可检测到Nelin蛋白的表达,对照组和正常组的表达量分别是(2.61±1.73)ng/mL、(3.64±1.65) ng/mL,两组差异有统计学意义(t=2.92,P＜0.01).结论 与正常人相比,下肢静脉曲张患者Nelin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,提示Nelin基因的表达可能与下肢静脉曲张发生发展有一定的关系.
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基因Nelin对人大隐静脉平滑肌细胞表型转化的影响
目的 观察Nelin对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响.方法 血清饥饿诱导VSMC由合成型向收缩型转变,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同表型VSMC的Nelin mRNA表达水平；转染Nelin-小干扰RNA(siRNA)沉默Nelin的表达,应用考马斯亮蓝染色法、乙酰胆碱(Ach)刺激法观察VSMC细胞骨架和收缩功能的变化.结果 Nelin mRNA在血清刺激组与血清饥饿24、48、72 h组表达量分别为:0.1940±0.0971、0.7114±0.1265、0.7270±0.1026、0.7841±0.1240,差异有统计学意义(P＜0.05).在血清饥饿培养过程中,VSMC细胞骨架由稀疏、模糊网状重构为均匀、致密束状,并重获收缩功能.抑制Nelin表达后,血清饥饿诱导的细胞骨架重构受阻,Ach诱发的细胞收缩消失.结论 Nelin参与VSMC骨架重塑并调节其收缩功能,对VSMC表型转化的调节、收缩表型的维持具有重要作用.
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Nelin与F-actin及Filamin相互作用的鉴定
目的 在用酵母双杂交方法将Nelin与人心脏cDNA文库进行杂交筛选,得到3个阳性克隆的基础上,进一步探讨新基因Nelin及其心肌表达产物Nelin蛋白的功能,并寻找能够与其发生相互作用的蛋白质.方法 采用基因转染和表达技术,在真核细胞内外分别进行了Nelin蛋白与肌动蛋白(F-actin)结合的共沉降及免疫荧光共定位实验.并通过免疫共沉淀实验进一步验证所得的实验结果.结果 证实了在细胞内外Nelin蛋白均能同F-actin相结合;还能与Filamin的C-末端免疫球蛋白样结构发生相互作用.结论 Nelin为一个新的兼有actin及Filamin结合能力的蛋白.在心肌细胞内,Nelin很可能作为一个膜一细胞骨架连接蛋白,参与了细胞黏着斑形成的过程.
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大隐静脉组织Nelin与TIMP-2表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用
目的:探讨大隐静脉组织Nelin与基质金属蛋白酶抑制物2(TIMP-2)表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用.方法:选取大隐静脉移植术后患者94例,根据是否合并下肢静脉曲张将其分为两组,研究组(合并下肢静脉曲张,48例),对照组(未合并下肢静脉曲张,46例).术中采集大隐静脉组织,采用免疫组化方法检测Nelin与TIMP-2表达,Masson染色显微镜下观察静脉重塑情况.结果:与对照组比较,研究组Nelin阳性率明显降低,TIMP-2阳性率明显增高,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);研究组平滑肌细胞增生,胶原纤维大量沉积;对照组血管壁结构完整,平滑肌细胞和胶原纤维均匀,排列规则;且研究组静脉壁厚度明显高于对照组,两组比较具有统计学差异(P＜0.05);Nelin阴性组静脉壁厚度明显高于Nelin阳性组,而TIMP-2阳性组静脉壁厚度明显高于TIMP-2阴性组,组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:大隐静脉组织通过下调Nelin或上调TIMP-2阳性表达促进下肢静脉曲张血管重塑的平滑肌细胞和胶原纤维异常改变.
