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百草枯诱导的SH-SY5Y细胞中核连蛋白2基因的表达变化
目的 检测核连蛋白(NUCB)2在百草枯(PQ)诱导的SH-SY5Y细胞中的表达变化,分析NUCB2在PQ引起的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用机制.方法 采用MTT法进行SH-SY5Y细胞毒性分析.选择PQ作用的佳浓度和时间点,进一步收取经PQ处理后的SH-SY5Y总RNA,首先采用RT-PCR方法观察NUCB2的表达趋势,然后采用real-time PCR方法进行NUCB2基因进行表达变化检测,采用ΔΔCt法进行定量比较分析.结果 MTT方法在酶标仪490 nm波长下,分析得到PQ的佳作用浓度和时间是0.5 mmol/L作用24 h,此时细胞活力较对照组低约41.67%;采用ΔΔCt法进行定量比较分析,发现NUCB2在mRNA水平的表达量明显降低(P=0.001 6);Western印迹检测发现SH-SY5Y细胞经PQ诱导后引起了caspase-3酶原形式的表达量降低(P<0.05).结论 NUCB2基因在经PQ诱导后的SH-SY5Y细胞中表达量明显降低,分析其可能在神经细胞的凋亡机制中发挥重要作用.
关键词： 核连蛋白(NUCB)2 PQ SH-SY5Y 凋亡 -
USP对无菌检验隔离器验证的技术要求
Isolator技术是国际上流行的无菌检测支持手段,对于确保无菌检测结果的准确性具有重要意义.USP30版1208章
详细介绍了隔离器(isolator)的使用历史、结构和功能、验证过程和技术要求,以及日常使用过程中维护和管理细节.特撰文介绍此药典专论,希望可以为中国无菌制药技术发展有所裨益. -
USP对实验室仪器验证技术要求探讨
验证是GMP实施的基础和关键环节,而实验室仪器的贮证,又是GMP实施过程中的难点和重点.很长时间以来,国内和国际对于制药公司实验室仪器的验证要求,存在不同的看法;同样,不同的药政机构也分别执行不同的规定.实验室仪器验证的广度和深度问题,一直是制药行业争论的焦点.2008年1月,USP颁布了关于实验室仪器的新专论<1058>分析仪器确认,对这个争论焦点给出了具体的规定.笔者现在介绍这个专论,并总结国际认证中对于仪器确认的基本要求.
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姜黄素激活Nrf2抗氧化系统缓解百草枯诱导的胰岛素抵抗
目的：观察姜黄素是否具有改善百草枯（ Paraquat，PQ）所致氧化应激诱导的胰岛素抵抗作用并探讨其改善胰岛素抵抗的效应机理。方法将实验小鼠随机分成对照组（ Control组），百草枯组（ PQ组）以及PQ加姜黄素组（ Cur组）。 PQ和Cur组连续腹腔注射百草枯7天造模成功后。 Cur组继续Cur灌胃干预。7天后，取胰岛素敏感组织肌肉，用蛋白免疫印迹方法（ Western blot，WB）检测蛋白水平和磷酸化变化，并检测脂质过氧化指标MDA。结果在PQ诱导的小鼠胰岛素抵抗模型中，姜黄素可改善小鼠葡萄糖耐量并对抗 PQ 所致的胰岛素信号蛋白 PKB－Ser473磷酸化损害；姜黄素还可明显降低肌肉MDA水平，激活小鼠Nrf2系统，促进Nrf2核转位和NQO－1的表达，同时能增强IкBα的水平，缓解氧化应激及炎症反应。结论姜黄素通过增强内源性Nrf2系统功能和胰岛素信号水平，对抗PQ诱导的氧化应激，是其缓解胰岛素抵抗的重要机理。
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姜黄素激活Nrf2抗氧化系统缓解百草枯诱导的胰岛素抵抗
目的：观察姜黄素是否具有改善百草枯（ paraquat，PQ）所致氧化应激诱导的胰岛素抵抗作用并探讨其改善胰岛素抵抗的效应机理。方法将实验小鼠随机分成对照组（ Control组），百草枯组（ PQ组）以及PQ加姜黄素组（ Cur组）。 PQ和Cur组连续腹腔注射百草枯7天造模成功后。 Cur组继续Cur灌胃干预。7天后，取胰岛素敏感组织肌肉，用蛋白免疫印迹方法（ Western blot，WB）检测蛋白水平和磷酸化变化，并检测脂质过氧化指标MDA。结果在PQ诱导的小鼠胰岛素抵抗模型中，姜黄素可改善小鼠葡萄糖耐量并对抗 PQ 所致的胰岛素信号蛋白 PKB－Ser473磷酸化损害；姜黄素还可明显降低肌肉MDA水平，激活小鼠Nrf2系统，促进Nrf2核转位和NQO－1的表达，同时能增强IкBα的水平，缓解氧化应激及炎症反应。结论姜黄素通过增强内源性Nrf2系统功能和胰岛素信号水平，对抗PQ诱导的氧化应激，是其缓解胰岛素抵抗的重要机理。
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银杏叶提取物治疗百草枯中毒小鼠的初步观察
目的:探讨银杏叶提取物(金纳多)对百草枯(PQ)染毒小鼠的治疗作用.方法:将110只小鼠随机分成3组:正常对照组10只、模型组和治疗组各50只.模型组和治疗组以110 mg/kg PQ-次性灌胃染毒,对照组给予等量蒸馏水灌胃;2h后治疗组予100 mg/kg金纳多灌胃治疗,模型组与对照组灌胃等量蒸馏水,每天1次,连续21d.观察给药后小鼠的每天死亡情况,比较21 d的生存率差异;在第21天处死所有存活的小鼠并收集肺组织,用免疫组织化学法测定肺组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达,苏木精-伊红及Masson染色观察小鼠肺组织病理变化.结果:模型组21 d存活18只,生存率36％,与对照组(存活10只,生存率100％)和治疗组(存活29只,生存率58％)比较差异有统计学意义(P＜0.05).第21天模型组肺组织VEGF免疫组化累积光密度(IOD)值(38 149.79±7 960.10)与对照组(4 315.06±2 351.94)和治疗组(18 027.09±5 251.88)比较差异有统计学意义(P＜0.01).苏木精-伊红和Masson染色显示第21天模型组肺组织炎性细胞浸润及纤维化改变明显,治疗组较模型组炎性细胞浸润较少,肺纤维化程度较轻(P＜0.01).结论:银杏叶提取物对PQ中毒小鼠具有治疗作用,其机制可能与抑制肺纤维化、抑制VEGF表达等有关.
